ニワトリの左右卵巣の不斉分化現象の遺伝子レベルの解析

鸡左右卵巢不对称分化的基因水平分析

• 批准号: 06270201
• 负责人: 水野 重樹
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06270201/
• 关键词: ニワトリ; 左右卵巣不斉分化; 初期胚雌雄判別; 性ステロイドホルモン; cDNA発現; mRNA定量; RT-PCR法; アンチセンスRNAプローブ

多くの鳥類では左卵巣のみが分化し、右卵巣は生殖腺形成初期に退化し痕跡状となる。本研究ではDNAプローブで雌雄判別したニワトリ初期胚を用いて、左右卵巣の遺伝子発現を比較することにより、この不斉分化現象の分子レベルの理解を深めることを目的とする。本年度は卵巣分化のマーカーとなる性ステロイドホルモン合成系遺伝子群のcDNAクローニングと発現解析を中心に研究を進めた。研究概要は以下の通りである。1)性ステロイドホルモン合成系遺伝子群のcDNAクローニング:ニワトリを材料としてまだ鳥類でクローニングされていないP-450scc、3β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ/Δ5→4イソメラーゼ、17β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼのcDNAクローニング、塩基配列決定、培養哺乳類細胞での発現による酵素活性確認を行った。2)性ステロイドホルモン合成系遺伝子群のニワトリ雌雄初期胚における発現解析:ふ卵2日から9日目なでの雌雄初期胚の全RNA1μg中の各mRNA量(atto moleレベル)をRT-PCR法で定量した。その結果、コレステロールからエストラジオールを生成する5種の酵素の遺伝子の中、アロマターゼ遺伝子のみが性特異的発現を示し、卵巣分化直前の5日目から雌胚でのみ発現が認められた。3)左右卵巣の組織形態観察とアンチセンスRNAプローブによるin situハイブリダイゼーション:7日から16日胚にかけて左右卵巣組織切片のHE染色を行い、7日胚の左卵巣で生殖細胞を含む皮質の肥厚を認めた。右卵巣もやや小型ながら組織退化は認められなかった。15日胚以降では右卵巣は著しい萎縮を示した。アロマターゼのアンチセンスRNAプローブによるin situハイブリダイゼーションの結果、左卵巣では一次性索と皮質で顕著なmRNA発現が見られたが、右卵巣では極めて低レベルの発現が一部の細胞で認められるのみであった。

In many birds, the left egg is differentiated, and the right egg is degraded in the early stage of gonad formation. The purpose of this study is to compare the development of DNA in early embryo, left and right embryo, and to deepen the understanding of molecular differentiation of DNA in early embryo. This year, the Center for the Analysis of cDNA Development of Gene Differentiation and Genetics has made progress. Study Summary: The following is a summary of the study. 1)The cDNA library of gene synthesis system gene subgroup: the cDNA library of gene material and gene sequence of bird, P-450scc, 3β-cDNA library of gene sequence of gene 2)Analysis of mRNA expression in early male and female embryos from day 2 to day 9 of embryo development: The amount of each mRNA in 1μg of total RNA from early male and female embryos was quantified by RT-PCR. As a result, 5 kinds of enzymes were produced in the middle of the embryo, and the sex-specific development of the embryo was recognized in the 5 days before the egg differentiation. 3)Histomorphological observation of left and right oocytes: HE staining of tissue sections from 7-day-old embryo to 16-day-old embryo, and hypertrophy of germ cells from 7-day-old embryo to left oocyte The right side of the egg is small and the tissue is degraded. On the 15th, the embryo fell and the right egg shrank. The expression of mRNA in the left and right cortex was detected in some cells.

项目成果

Osamu Nakabayashi: "The cDNA cloning and transient expression of a chicken gene encoding a 3β‐hydroxy‐steroid dehydrogenase/Δ5→4 isomerase unique to major steroidogenic tissues" Gene. (in press). (1995)

Osamu Nakabayashi：“编码主要类固醇生成组织特有的 3β-羟基类固醇脱氢酶/Δ5→4 异构酶的鸡基因的 cDNA 克隆和瞬时表达”（正在出版）。