鳥類のZW型性決定機構のゲノム生物学的アプローチによる解析

使用基因组生物学方法分析鸟类 ZW 型性别决定机制

• 批准号: 15011252
• 负责人: 水野 重樹
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011252/
• 关键词: ニワトリ; 性決定; 性染色体; W染色体; サブトラクションcDNAライブラリー; cDNAマクロアレイ; 生殖腺分化; 雌特異的cDNAクローン

性決定および性分化初期過程に関与する可能性のある性染色体、特にW染色体上の遺伝子を網羅的に検索する目的で、ニワトリ2日胚(Hamburge-Hamilton stage 12〜13),3日胚(stage 19〜20),4日胚(stage 24〜25)の胚全体、5日胚(stage 27)の未分化生殖腺+中腎の一部からそれぞれ雌マイナス雄サブトラクションcDNAライブラリーを作製し、各ライブラリーから約5,000クローンずつ、合計21,120クローンをマクロアレイ化した。これらのマクロアレイをそれぞれ対応するステージの雌マイナス雄、雄マイナス雌サブトラクションcDNA,雌トータルcDNA,雄トータルcDNA, W染色体上の既知遺伝子PKCI-W cDNAをそれぞれプローブとして逐次ハイブリダイゼーションを行った結果、サブトラクションcDNAプローブで1127個、トータルcDNAプローブで104個の雌特異的発現の著しい、PKCI-W以外のcDNAクローンが選別された。サブトラクションcDNAプローブで多数のクローンが選別されたことは、これらのクローンがコピー数の少ないmRNAに由来することを示唆した。また、1127個のクローンの中、2日胚から170個が得られたことは、生殖腺分化(6日胚以降)に著しく先行して雌特異的な遺伝子発現が行われていることを示すもので、興味深く思われた。'そこで2日胚、3日胚、4日胚からサブトラクションcDNAプローブで選別され556クローン中532クローンをそれぞれアルカリホスファターゼ標識プローブとして、5種類の制限酵素でそれぞれ消化した雌雄のゲノムDNAに対するサザンブロットハイブリダイゼーションを行い、W染色体上の遺伝子由来と予想される67クローンを選別し、これらをハイブリダイゼーションのパターンから15タイプに分類した。各タイプに属する1クローンずつのcDNA塩基配列を決定したところ、W染色体上の遺伝子として既知のSPIN-Wに相当する3タイプ、ATP5A1Wに相当する1タイプの他、W染色体上の数種の未知の遺伝子由来のcDNAクローンが存在することが示唆され、塩基配列解析とW染色体上の局在部位の解析を進めている。

Sex determination お よ び early sexual differentiation process に masato and す る possibility の あ る sex chromosomes, に W chromosome の heritage 伝 son を snare に 検 cable す る purpose で, ニ ワ ト リ 2 embryos (Hamburge - Hamilton stage 12 ~ 13), 3 embryos (stage 19 ~ 20), 4 embryos (stage 24 ~ 25) の embryo entire embryo stage (27), 5 の undifferentiated gonad + kidney の a か ら そ れ ぞ れ female マ イ ナ ス male サ ブ ト ラ ク シ ョ ン cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を し, the different ラ イ ブ ラ リ ー か ら about 5000 ク ロ ー ン ず つ, total 21120 ク ロ ー ン を マ ク ロ ア レ イ change し た. こ れ ら の マ ク ロ ア レ イ を そ れ ぞ れ 応 seaborne す る ス テ ー ジ の female マ イ ナ ス male, male マ イ ナ ス female サ ブ ト ラ ク シ ョ ン cDNA, female ト ー タ ル cDNA, male ト ー タ ル cDNA, On chromosome W, there is a 伝 offspring PKCI-W CDNA を そ れ ぞ れ プ ロ ー ブ と し て successive ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を line っ た results, サ ブ ト ラ ク シ ョ ン cDNA プ ロ ー ブ で 1127, ト ー タ ル cDNA プ ロ ー ブ で 104 の female specific 発 の now the し い, PKCI - W の cDNA ク ロ ー ン が choose don't さ れ た. サ ブ ト ラ ク シ ョ ン cDNA プ ロ ー ブ で most の ク ロ ー ン が choose don't さ れ た こ と は, こ れ ら の ク ロ ー ン が コ ピ ー number less の な い mRNA に origin す る こ と を in stopping し た. ま た, 1127 の ク ロ ー ン の, 2 in the embryo か ら 170 が ら れ た こ と は, differentiation of gonads に embryo in (6) the し く first し て な of female specific 伝 son 発 line now が わ れ て い る こ と を shown す も の で, fun deep く わ れ た. 'そ こ で 2, 3, 4, embryo か ら サ ブ ト ラ ク シ ョ ン cDNA プ ロ ー ブ で choose don't さ れ 556 ク ロ ー ン in 532 ク ロ ー ン を そ れ ぞ れ ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ logo プ ロ ー ブ と し て limitations, 5 kinds の enzyme で そ れ ぞ れ digestion し た male and female の ゲ ノ ム DNA に す seaborne る サ ザ ン ブ ロ ッ ト ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を い, W chromosome の heritage 伝 origin と son to think さ れ る 67 ク ロ ー ン を don't し, こ れ ら を ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン の パ タ ー ン か ら 15 タ イ プ に classification し た. Each タ イ プ に genus す る 1 ク ロ ー ン ず つ の cDNA salt base with column を decided し た と こ ろ, W chromosome の heritage 伝 son と し て already know の SPIN - W に す る 3 タ イ プ, ATP5A1W に quite す る 1 タ イ プ の he, W chromosome の several の unknown の heritage 伝 son origin の cDNA ク ロ ー ン が exist す る こ と が business さ Youdaoplaceholder0, analysis of the base coordination と, analysis of the <s:1> local sites on the W chromosome を enter めて る る る.