鳥類のZW型性決定機構のゲノム生物学的アプローチによる解析

使用基因组生物学方法分析鸟类 ZW 型性别决定机制

• 批准号: 15011252
• 负责人: 水野 重樹
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011252/
• 关键词: ニワトリ; 性決定; 性染色体; W染色体; サブトラクションcDNAライブラリー; cDNAマクロアレイ; 生殖腺分化; 雌特異的cDNAクローン

性決定および性分化初期過程に関与する可能性のある性染色体、特にW染色体上の遺伝子を網羅的に検索する目的で、ニワトリ2日胚(Hamburge-Hamilton stage 12〜13),3日胚(stage 19〜20),4日胚(stage 24〜25)の胚全体、5日胚(stage 27)の未分化生殖腺+中腎の一部からそれぞれ雌マイナス雄サブトラクションcDNAライブラリーを作製し、各ライブラリーから約5,000クローンずつ、合計21,120クローンをマクロアレイ化した。これらのマクロアレイをそれぞれ対応するステージの雌マイナス雄、雄マイナス雌サブトラクションcDNA,雌トータルcDNA,雄トータルcDNA, W染色体上の既知遺伝子PKCI-W cDNAをそれぞれプローブとして逐次ハイブリダイゼーションを行った結果、サブトラクションcDNAプローブで1127個、トータルcDNAプローブで104個の雌特異的発現の著しい、PKCI-W以外のcDNAクローンが選別された。サブトラクションcDNAプローブで多数のクローンが選別されたことは、これらのクローンがコピー数の少ないmRNAに由来することを示唆した。また、1127個のクローンの中、2日胚から170個が得られたことは、生殖腺分化(6日胚以降)に著しく先行して雌特異的な遺伝子発現が行われていることを示すもので、興味深く思われた。'そこで2日胚、3日胚、4日胚からサブトラクションcDNAプローブで選別され556クローン中532クローンをそれぞれアルカリホスファターゼ標識プローブとして、5種類の制限酵素でそれぞれ消化した雌雄のゲノムDNAに対するサザンブロットハイブリダイゼーションを行い、W染色体上の遺伝子由来と予想される67クローンを選別し、これらをハイブリダイゼーションのパターンから15タイプに分類した。各タイプに属する1クローンずつのcDNA塩基配列を決定したところ、W染色体上の遺伝子として既知のSPIN-Wに相当する3タイプ、ATP5A1Wに相当する1タイプの他、W染色体上の数種の未知の遺伝子由来のcDNAクローンが存在することが示唆され、塩基配列解析とW染色体上の局在部位の解析を進めている。

Sex determines the process and possibility of sexual differentiation in the early stages of sexual differentiation, including sex chromosomes, special W chromosomes, Hamburge-Hamilton stage 2-day embryos (stage 12-13) and 3-day embryos (stage 19-20). 4-day embryo (stage 24-25), 5-day embryo (stage 27), undifferentiated gonad + 1-day embryo, 4-day embryo, 5-day embryo, undifferentiated gonad, undifferentiated gonad, I don't know. I don't know, I don't know, On the W chromosome, we know that both PKCI-W cDNA and cDNA were selected for each step of the chromosome, the results of each step-by-step step-by-step cDNA test, the results of each step-by-step cDNA test, the number of women who were selected from each other, the number of women who were not selected from each other, and the number of women who were not selected. Please tell me that most of the cDNA employees have chosen to pay more information, and that the number of mRNA has been greatly reduced. In the 1127 pregnant women, the gonad differentiation and gonadal differentiation (6 days later) were carried out in 1127 pregnant women, and the gonad differentiation (6 days later). The 2nd, 3rd and 4th embryos of the second, 3rd and 4th embryos were selected and selected. In the 556, 532 embryos, DNA, and 4-day embryos were selected, and the labels were identified and digested by restriction enzymes. The cause of the disease on the W chromosome is that you want to make a choice. Please do not choose one or the other. You may want to make a classification. In each case, there are several unknown cDNA genes on the W chromosome, which are known to be equivalent to SPIN-W, ATP5A1W, and several unknown genes on the W chromosome. Base alignment analysis of the locus on the W chromosome was performed.