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染色体の核内配置とその要因

染色体核排列及其影响因素

基本信息

批准号：
07282102
负责人：
水野重樹
金额：
$ 132.54万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

水野はニワトリのクロモボックスタンパク質CHCB1とその様々な欠失変異体またはクロモボックスをCHCB2,-3のクロモボックス配列と交換した変異体のcDNAクローンをHA-タグを付した形で雌ニワトリの繊維芽細胞で高発現させ、CHICB1のクロモボックスがWヘテロクロマチンの凝縮に関与することを示した。しかし、CHCB1自体はDNA結合性を示さないため、Wヘテロクロマチンを構成するEcoRIファミリー反復配列を含むプラスミドにヌクレオソームを再構築し、これにCHCB1を結合させるアダプター活性を有する核内タンパク質を検索した、その結果、ニワトリMSB-1細胞のクロマチン画分に熱安定性を示し、アダプター活性をもつタンパク質が含まれることが分かり、精製を進めている。石川は出芽酵母を用いて染色体テロメア長の維持に必要と考えられるATMファミリー遺伝子TEL1,RAD3の機能解析を行った。それぞれの遺伝子の変異tell,rad3のいずれかをもつ株ではテロメア長はわずかな短小化しか示さなかったが、これらの二重変異株ではテロメア長の極度の短小化、染色体の不安定化、コロニーの不整形化が観察された。しかし、数百個に1個の割合で正円形コロニーを形成する復帰株が得られた。これらの復帰株ではテロメアDNAは完全に失われ、3本の染色体全てが自己環状化して保持されていることが分かった。丹羽は分裂酵母の紡錘極体(SPB)の構成成分KMS1遺伝子産物の機能を調べるため、kmsl^+株とkmsl突然変異株におけるミニ染色体と正常染色体との間の組み換え頻度を較べた。その結果正常では極めて低い組み換え頻度がkmsl変異により増加することが示され、減数分裂期の相同染色体対合の異常がこのような結果を生むと考えた。また、kmsl^+遺伝子産物と相互作用するダイニン軽鎖類似でSPBに局在するタンパク質を見いだした。平岡はマルチカラー蛍光顕微鏡観察によりヒト培養細胞の分裂期の前中期に核移行能の消失の直前に核膜の変形が中心体付近で起きること、終期には核膜の再形成と核膜孔複合体の集合が核移行能回復に先だって起こることを示した。堀田はユリの減数分裂期特異的な遺伝子産物LIM13がパキテン期に染色体上に集合するがDNA結合能はないことに着目し、酵母two-hybrid法で検索したところ、ヒストンHZ2AがLIM13と相互作用することを認めた。舛本はヒトのアルフォイド反復DNAを含む人工染色体を構築し、ヒト培養細胞でのセントロメア形成には反復配列中のCENP-B box配列の存在が必要であり、この配列に結合したCENP-BにCENP-Cなどのセントロメアタンパク質が相互作用することで機能的なセントロメアが構築されることを免疫沈降法で示唆した。

Mizuno Hidden WaterたはクロモボックスをCHCB2,-3のクロモボックス arrangement and exchange した変variantのc DNA クローンをHA-タグをpay したshaped でfemale ニワトリの繊dimensional bud cell で高発appear させ、C HICB1のクロモボックスがWヘテロクロマチンのcondensation pass and することをshows it.しかし、CHCB1 autologous DNA binding ability さないため、Wヘテロクロマチンを constitute するEcoRIファミリー Repeated Arrangement をContaining むプラスミドにヌクレオソームをReconstruction し, これにCHCB1をCombined させるアダプターActivityを有する内タンパク性を検SOした、そのRESULTS、ニワトリMSB-1cellsのクロマチン画Thermal stability is shown, the active ingredients are active ingredients, and the ingredients are refined and refined. Ishikawa's budding yeast を use of いて chromosome テロメアのmaintenance necessary とtest えられるATM ファミリー缝子 TEL1, RAD3 を row った.それぞれの缝子の変different tell, rad3のいずれかをもつ Zhuではテロメア长はわずかな shortened and shortened しかshowさなかったが, これらのDouble strain ではテロメア长の extremely short, chromosomal instability, コロニーの不shaped が観看された.しかし、Hundreds of に1の合で正円shaped コロニーをformed する渰区が得られた. The DNA of the compound strain is completely lost, and the three chromosomes are all circularized and maintained. Niwa's spindle polar body (SPB) component of fission yeast KMS1 and its functional components, kms The l^+ strain and kmsl suddenly changed the chromosomes of the different strains and the normal chromosomes and the frequency between the groups. The result is normal It shows that the results of the abnormality of the same chromosome coupling in the meiosis period are the results of the test.また、kmsl^+缝子product and interaction するダイニン軽 lock is similar to でSPBにbureau in するタンパク性を见いだした. Hiraoka's Microscope Observation of Cultured Cells in the Prophase and Metaphase of Division, the Disappearance of Nuclear Migration Energy, the Straight Before the Nuclear Membrane, and the Deformation of the Nuclear Membrane The core body is close to the core, the nuclear membrane is re-formed in the terminal phase, and the nuclear membrane pore complex is assembled and the nuclear migration can be restored. Hotta's meiosis-specific nucleoside product LIM13 is a set of DNA binding energy on the chromosome during the meiosis stage. Focus on the purpose, the yeast two-hybrid method and the interaction of the yeast two-hybrid method, and the interaction of the yeast two-hybrid method.蛛本はヒトのアルフォイド Repeated DNA Containing Artificial Chromosome Constructionし、ヒトCultured Cellsでのセントロメア Formationには Repeated Arrangement CENP-B The existence of box arrangement is necessary, and the combination of box arrangement and combination is CENP-BにCENP-CなどのセントロメThe なセントロメアが structure of the されることをimmunosedimentation method of the なセントロメアが is a することで function.