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細胞周期におけるヘテロクロマチンDNAの後期複製機構の解析

细胞周期中异染色质DNA晚期复制机制分析

基本信息

批准号：
06262202
负责人：
水野重樹
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリゲノム中の主要なヘテロクロマチンは性染色体に見られ、W染色体の約65%を占めるXhoI,EcoRI両湾曲反復配列が形成するドメインとZ染色体の一端部に存在する。WヘテロクロマチンのDNAは著しい後期複製が示すが、Z端部ヘテロクロマチンはそのような現象を示さない。本年度の研究概要は以下の通りである。1)Z染色体端部由来のゲノムライブラリーからランダムに選んだ100クローンを混合プローブとして、雌ニワトリのゲノムライブラリーを検索して約13kbのインサートを含むpCHZTH8クローンを得た。蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)により、このクローンがZ染色体端部のヘテロクロマチンを構成する反復DNA配列であることが示された。この配列は明瞭な内部繰返し単位をもたず、湾曲性も示さない。約30kbを単位とするマクロサテライトであり、大部分はGallus属に特有な配列である。2)Wヘテロクロマチンに含まれる非ヒストンタンパク質をXhoI,EcoRIファミリー配列に親和性をもつタンパク質としてサウスウエスタンブロット法やアフィニテイー磁気ビーズ法で検索した。その結果、DNAトポイソメラーゼIとp80が見いだされ、ともに精製し、抗体を作成した。現在、両者のcDNAクローニング、塩基配列決定を進めている。DNAトポイソメラーゼIはin vitroでXhoI,EcoRIファミリー配列中の複数部位に作用することをカンプトテシン存在下の切断活性により示した。p80はクロマチンをわずかにヌクレアーゼ処理すると核から遊離するHMG17に類似した性質を示した。3)アフィニテイー磁気ビーズ法でXhoIファミリーのメチル化状態を認識して結合する2種類のDNA結合タンパク質をMSB-1細胞核から濃縮した。

The main sex chromosomes in the ニワトゲノム中なヘテロクロマチンはsex chromosomes and the W chromosomes account for about 65%るXhoI,EcoRI両Wanqu is repeatedly arranged and formed, and it exists at one end of the Z chromosome. The late copying of W DNA and the late copying of DNA, and the DNA phenomenon of Z-terminal DNA. The summary of this year's research is as follows. 1) Origin of the end of the Z chromosome Female ニワトリのゲノムライブラリーを検SO して is about 13kbのインサートをcontaining むpCHZTH8 クローンを得た. Yong Guang in situハイブリダイゼーション(FISH)により、このクローンがZ dyeing The structure of the end of the body consists of repeated DNA arrangement and the structure of the body ends. The internal structure of the arrangement is clear, and the inner surface is clear and the shape is clear. Approximately 30kb single-bit とするマクロサテライトであり, most of the Gallus genus and unique な arrangement である. 2)W ヘテロクロマチンに无ヒストンタンパクqualityをXhoI,EcoRIファミリーmatching parent和性をもつタンパク性としてサウスウエスタンブロット法やアフィニテイーMagnetic 気ビーズ法で検SOした.その results, DNA トポイソメラーゼI とp80 が见いだされ, ともにrefined し, antibody をproduced した. Now, the cDNA sequence of the cDNA sequence and the base sequence have been determined. DNAトポイソメラーゼIはin XhoI in vitro, EcoRI ファミリー combination of multiple parts of the action of することをカンプトテシン in the presence of cutting activity によりした. p80はクロマチンをわずかにヌクレアーゼprocessingするとnuclearからfreeするHMG17にsimilar propertiesしたをshowした. 3) Awareness of アフィニテイーMagnetic ビーズ法でしてcombinationする2 types of DNA binding タンパク性をMSB-1 cell nucleus からconcentrationした.