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細胞周期におけるヘテロクロマチンDNAの後期複製機構の解析

细胞周期中异染色质DNA晚期复制机制分析

基本信息

批准号：
06262202
负责人：
水野重樹
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリゲノム中の主要なヘテロクロマチンは性染色体に見られ、W染色体の約65%を占めるXhoI,EcoRI両湾曲反復配列が形成するドメインとZ染色体の一端部に存在する。WヘテロクロマチンのDNAは著しい後期複製が示すが、Z端部ヘテロクロマチンはそのような現象を示さない。本年度の研究概要は以下の通りである。1)Z染色体端部由来のゲノムライブラリーからランダムに選んだ100クローンを混合プローブとして、雌ニワトリのゲノムライブラリーを検索して約13kbのインサートを含むpCHZTH8クローンを得た。蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)により、このクローンがZ染色体端部のヘテロクロマチンを構成する反復DNA配列であることが示された。この配列は明瞭な内部繰返し単位をもたず、湾曲性も示さない。約30kbを単位とするマクロサテライトであり、大部分はGallus属に特有な配列である。2)Wヘテロクロマチンに含まれる非ヒストンタンパク質をXhoI,EcoRIファミリー配列に親和性をもつタンパク質としてサウスウエスタンブロット法やアフィニテイー磁気ビーズ法で検索した。その結果、DNAトポイソメラーゼIとp80が見いだされ、ともに精製し、抗体を作成した。現在、両者のcDNAクローニング、塩基配列決定を進めている。DNAトポイソメラーゼIはin vitroでXhoI,EcoRIファミリー配列中の複数部位に作用することをカンプトテシン存在下の切断活性により示した。p80はクロマチンをわずかにヌクレアーゼ処理すると核から遊離するHMG17に類似した性質を示した。3)アフィニテイー磁気ビーズ法でXhoIファミリーのメチル化状態を認識して結合する2種類のDNA結合タンパク質をMSB-1細胞核から濃縮した。

The main sex chromosome in the EcoRI genome is the W chromosome, which accounts for about 65% of the XhoI chromosome. The EcoRI chromosome is repeatedly aligned to form the Z chromosome. The DNA of the W-terminal region was replicated in the late stage, and the DNA of the Z-terminal region was replicated in the late stage This year's research summary is as follows: 1) The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the source and the dye from the female. The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the source and the dye from the female. The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the female. The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the female. The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the male. The end of the Z-dye is obtained by mixing the dye with the dye from the female. The end of the Z-dye is about 13kb in size and contains the dye from the female. The DNA sequence of the chromosome ends is repeated. This arrangement is clear inside the unit, curved inside the unit. About 30kb. 2)W. C. C. The results of DNA purification and antibody production Now, the cDNA of the donor is changed, and the nucleotide alignment is determined. DNA sequencing in vitro,EcoRI sequencing in the presence of a number of sites to cut off activity p80- 3) The magnetic field method is used to recognize the DNA binding state of two kinds of DNA binding proteins in MSB-1 cells.