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DNAおよび転写因子との相互作用に関わるRNAポリメラーゼ上の構造

参与与 DNA 和转录因子相互作用的 RNA 聚合酶的结构

基本信息

批准号：
06276220
负责人：
藤田信之
金额：
$ 1.73万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06276220/
关键词：
大腸菌 RNAポリメラーゼ αサブユニット構造-機能相関転写調節

项目摘要

大腸菌RNAポリメラーゼは機能的に2つの領域に分けられる。すなわちN末端領域(アミノ酸残基21-235)がRNAポリメラーゼのサブユニット集合に重要な役割を果たし、C末端領域(アミノ酸残基236-329)は数多くのクラスI転写因子による転写活性化に関与している。今年度はN末端領域に欠失、挿入、アミノ酸置換を持つ変異体を多数作成し、in vitro再構成系を用いて機能の解析を行なった。その結果αサブユニットのN末端領域にβサブユニット、β'サブユニットとの相互作用に重要な部位をそれぞれ同定することができた。一方C末端領域については、CRP(cAMP受容蛋白)およびエンハンサーエレメント(UPエレメント)との相互作用に重要と思われる260-270アミノ酸残基の領域に集中的にアミノ酸置換変異を導入し、変異体RNAポリメラーゼを再構成してそれらの機能を解析した。その結果265番目のArgがCRPおよびUPいずれとの相互作用にも重要な役割を果たしていることがわかった。2つの機能領域が構造とどのように関わっているかを調べるため、プロテアーゼ限定分解による解析を行なった。トリプシン、V8プロテアーゼいずれの場合にも、最初の切断部位はアミノ酸残基240付近に集中しており、構造的にも2つの独立したドメインから構成されていることがわかった。現在、転写活性化ドメイン(アミノ酸残基233-239)を単独で発現、精製し、NMRによる構造解析をすすめている。

E. coli RNA transcription is not functional. The N-terminal domain (residues 21-235) is important for RNA diversity and the C-terminal domain (residues 236-329) is important for the activation of transcription factors. This year, the N-terminal domain is missing, acid replacement, heterogenous, in vitro reconstruction, and functional analysis. The result is that the N-terminal domain of α- The interaction between CRP(cAMP receptor protein) and C-terminal domain is important. The interaction between CRP(cAMP receptor protein) and C-terminal domain is important. The interaction between CRP (cAMP receptor protein) and C-terminal domain is important. The results of the 265-point CRP and UP interaction are important. 2. Functional domains are structured and analyzed. In the case of V8, the acid residues 240 are concentrated in the initial cleavage site, and the structure of V8 is composed of two independent residues. Now, we have prepared the activated protein (amino acid residues 233-239) for identification, purification, NMR and structural analysis.