权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

大腸菌RNAポリメラーゼのαサブユニットを介した転写活性化のメカニズム

大肠杆菌RNA聚合酶α亚基介导的转录激活机制

基本信息

批准号：
13014220
负责人：
藤田信之
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014220/
关键词：
大腸菌 RNAポリメラーゼ転写調節 αサブユニット転写因子 UPエレメント

项目摘要

RNAポリメラーゼαサブユニットのC末端ドメインは、cAMP受容蛋白 (CRP) をはじめとする様々な転写因子や、プロモーター上流に存在するUPエレメントと呼ばれるATリッチなDNA配列との相互作用を介して、転写活性化に重要な役割を果たす。C末端ドメインとRNAポリメラーゼ本体をつなぐリンカー部分をpoly-Glycineに置き換えた変異は、in vitroにおけるCRP依存の転写およびUPエレメント依存の転写を強く阻害したが、DNaselフットプリンティングの結果から、転写複合体の形成、とりわけαC末端ドメインとプロモーター上流域DNAとの相互作用にはほとんど影響がないことがわかった。しかしながら、複合体形成にともなう転写開始点付近のDNA鎖の開裂 (開鎖複合体の形成) は有意に減少していた。また、αC末端ドメイン上のアミノ酸置換によってUPエレメント依存の活性が減少した変異体10種類についてDNaselフットプリンティングを行ったところ、転写活性と複合体形成能は必ずしも相関しないことがわかった。これらの結果は、転写の活性化には複合体形成 (recruitment) だけでは不十分であり、その後に起こるDNA鎖開裂などのプロセス (post-recruitment) が重要であること、さらに、そのプロセスにαのドメイン間リンカーとC末端ドメインそのものの構造が大きく関与していることを示唆している。αサブユニットのC末端ドメインは、rrnB (リボソームRNAオペロン)のような典型的なUPエレメントを持つプロモーターだけでなく、より広範囲のプロモーターにおいてプロモーター上流域DNAと相互作用し、これによって転写複合体の形成を促進したり、転写因子による活性化を仲介すると考えられる。非典型的なUPエレメントを持つプロモーターの例としてT7Dプロモーターを取り上げ、これとrrnBプロモーターとの違いを明らかにするため、αC末端ドメインのアラニン置換変異体約30種類を作成しこれらの変異に対する応答を比較した。また、DNaselフットプリンティング、ヒドロキシルラジカルフットプリンティング、C末端ドメイン上に導入した鉄・EDTA誘導体によるDNA鎖切断、その他のフットプリンティング手法を用いてDNAとの相互作用様式を解析、比較した。その結果、両者においてDNAとαC末端ドメインとの相互作用様式はおおまかには類似しているものの、C末端ドメイン上のいくつかのアミノ酸、とりわけヘリックスIIIとIV上のアミノ酸の相対的な寄与が異なっていることがわかった。

The C-terminal region of the α-terminal region of the RNA molecule, the cAMP receptor protein (CRP), and the up-stream presence of the mRNA molecule are important for DNA alignment and interaction. C-terminal DNA and RNA molecules are the main components of poly-Glycine, which are different from each other, in vitro, CRP dependent DNA and UP dependent DNA, which are strongly inhibited by DNA and RNA molecules. DNA lock cracking near the start point of complex formation is intentionally reduced. The activity of complex formation is dependent on the activity of acid substitution on α-terminal and α-terminal. As a result of this, the activation of DNA and the formation of a complex (recruitment) are not very important, and the post-recruitment of DNA lock cleavage is very important. The C-terminal region of α-terminal RNA is characterized by up-regulation and up-regulation of DNA interaction in the upstream region. The formation of DNA complex is promoted by up-regulation and activation of transcription factors. An example of an atypical UP profile is a T7D profile, which is selected from the top, bottom, and bottom of an alpha C-terminal profile, with about 30 types of substitutions. Analysis and comparison of DNA and DNA interaction models for DNA lock cleavage and other DNA lock cleavage methods introduced into iron and EDTA inducers at C-terminal sites. As a result, the interaction pattern between DNA and α C-terminal DNA is similar to that of DNA and α C-terminal DNA, and the interaction pattern between DNA and α C-terminal DNA is similar to that of DNA and α C-terminal DNA.