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テラトーマ発症におけるc-Kitとそのリガンド及び新規キナーゼタンパク質の関与

c-Kit、其配体和新型激酶蛋白参与畸胎瘤的发生

基本信息

批准号：
06281205
负责人：
松居靖久
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

テラトーマは生殖細胞に由来する腫瘍で、特定の系統のマウスに高率に生ずることが知られているが、その発症の分子機構は明らかでない。本研究では、始原生殖細胞の増殖制御因子であるS1因子と、そのレセプターであるc-Kitの過剰発現がテラトーマ発症の原因となるかを調べることを第1の目的としている。そのために生殖系列で特異的に発現するoct-3遺伝子の上流約2Kbpを含むDNA断片をマウスc-kitcDNAにつないだキメラ遺伝子を用いてc-Kitを始原生殖細胞で過剰発現するトランスジェニックマウスを作った。得られた8系統のトランスジェニックマウスのうち5系統で、導入した遺伝子の精巣での発現が見られた。現在これらの始原生殖細胞の初代培養を試みている。予備的な実験結果では、正常マウスに比べてトランスジェニックマウスでは細胞数の増加が顕著であることが示唆された。またこれまでにEF-1α遺伝子プロモーターとS1因子cDNAによるトランスジェニックマウスも得ているので、両者の交配によりテラトーマが発症するかどうかを調べていく予定である。また、本研究の第2の目的として生殖細胞や、その支持細胞で発現する未知のキナーゼ遺伝子をクローニングし、同様にテラトーマ発症との関連を明らかにすることをめざした。始原生殖細胞由来の細胞株であるEG細胞を材料に、キナーゼの活性領域の保存配列に対するプライマーを使ってRT-PCRを行い、既知のものを含む20種類のキナーゼをコードするcDNA断片を得た。このうち、成体での発現が精巣、卵巣及び脳にのみ見られた、レセプターチロシンキナーゼSky/rseについて、全長をコードするcDNAをクローニングし、さらにin situ hybridization法により発生過程及び生殖巣での発現を調べた。その結果、発生過程から生後にかけて、主に生殖細胞の支持細胞で発現していることが明らかになった。

The germ cell origin, the specific system, the high rate of reproduction, the knowledge, the molecular mechanism of the disease The aim of this study is to investigate the factors that control the reproduction of protogerm cells, such as S1 factor, c-Kit, and the causes of the development of protogerm cells The gene sequence of the oct-3 gene was developed specifically for the initial germ cell by using a c-kit cDNA fragment of about 2Kbp. The 8-point system was introduced, and the essence of the 8-point system was discovered. Now, we try to culture the primordial germ cells in vitro. The results of the preparation are as follows: 1. The EF-1 alpha gene is selected from the group consisting of the S1 gene cDNA, the EF-1 alpha gene, and the EF-1 alpha gene. The second objective of this study is to clarify the relationship between germ cells and supporting cells. Cell lines derived from primordial germ cells were identified from EG cells, and cDNA fragments of 20 species of EG cells were identified from the cell lines. The development of sperm, egg and sperm is regulated by the method of site hybridization, which regulates the development of sperm, egg and sperm. The result, the development process, the development of germ cells and support cells