始原生殖細胞由来の胚幹細胞株の発生工学への応用

原始生殖细胞来源的胚胎干细胞系在发育工程中的应用

• 批准号: 05275201
• 负责人: 松居 靖久
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05275201/
• 关键词: 始原生殖細胞; 胚幹細胞; 遺伝子ターゲッティング法; セリン; スレオニンキナーゼ

遺伝子ターゲッティング法では、胚幹細胞由来遺伝子の子孫への伝達率と、変異の表現形に対する遺伝的背景の影響が問題になる。こういった点を克服する目的で、代表的な近交系マウスであるC57Bl/6、Balb/c、DBA/2、C3H/He、129Sv/Jの8.5日胚の始原生殖細胞から胚幹細胞株(EG細胞)を樹立した。始原生殖細胞を膜結合型Sl因子、LIFおよびbFGFの存在下に初代、継代培養して得たEG細胞は、いずれもコロニーの形態は129Sv系統の胚盤胞から得たES細胞とよく似ており、また未分化胚幹細胞のマーカーであるアルカリ性フォスファターゼと4C9抗原を発現していることが分かった。現在これらをC57Bl/6またはBalb/cの胚盤胞にマイクロインジェクションし、キメラ形成能及び子孫への伝達の効率を調べている。また、EG細胞が未分化状態で安定に増殖するのに必要な、新しいキナーゼ型増殖因子レセプター遺伝子の同定を試みた。EG細胞のmRNAを材料に、キナーゼの保存配列に対するプライマーを使ってRT-PCRを行い、EG細胞や生殖巣などで特異的に発現する4種類のキナーゼ遺伝子(GCK1、2、3、4)をクローニングした。このうちGCK1、2は新しいセリン/スレオニンキナーゼを、GCK3はPolo like kinaseをコードし、またGCK4はトリv-rykと相同性のあるタンパク質をコードする事がわかった。さらにGCK2はcDNAライブラリーから、ほぼ全長をコードする3.4KbのcDNAを得、その配列から非レセプター型のセリン/スレオニンキナーゼをコードすることが明らかになった。今後EG細胞にこれらの遺伝子を導入することにより、その増殖における役割を解析する予定である。また、生殖細胞の増殖、分化における機能をトランスジェニックマウスと遺伝子ターゲッティング法により解析する予定である。

This is the first time that you have a problem with the background of the problem. The inbred lines represented by the inbred lines C57Bl/6, Balb/c, DBA/2, C3H/He, 129Sv/J, 8.5-day embryo primordial reproductive cell, embryo cell line (EG cell) were isolated. The membrane-bound Sl factor and LIF gene bFGF gene of primordial reproductive cells were found in the following generations, the EG cells were obtained by culture, the ES cells were isolated from the embryos of the 129Sv system, and the undifferentiated embryos were isolated from the cells of the undifferentiated embryos. The results showed that there was no significant difference between the two groups. At present, the formation energy and the rate of formation of C57Bl/6 and Balb/c embryos are higher than that of normal embryos. The undifferentiated status of EG cells, stable colonies, necessary colonies and new colonization factors were the same as those of the control group. The EG system uses mRNA materials to make sure that the data sets are used to make RT-PCR data and EG cells have special information on how to make sure that GCK1, 2, 3, 4, and so on, can be detected. GCK1, 2, Polo like kinase, Polo like kinase, GCK4, v-ryk, and so on. In order to improve the overall performance of the cDNA, the full length of the 3.4Kb cDNA will be obtained, and the information will be allocated to the system to improve the performance. From now on, the EG cell will not be able to make a decision. After that, you will be able to analyze the predetermined data. The mechanism of cell colonization and differentiation of reproductive cells can be used in the analysis of predetermined conditions.

项目成果

松居靖久: "生殖細胞の生成と増殖,分化" 細胞工学. (1994)

Yasuhisa Matsui：“生殖细胞的生成、增殖和分化”细胞工程（1994）。

松居靖久: "Sl因子による始原生殖細胞の増殖制御機構" Medical Immunology. 26. 81-88 (1993)

Yasuhisa Matsui：“Sl因子控制原始生殖细胞增殖的机制”医学免疫学26. 81-88 (1993)。

松居靖久: "始原生殖細胞由来の細胞株の胚幹細胞としての性質" 日本疾患モデル学会記録. 9. 9-14 (1993)

Yasuhisa Matsui：“源自原始生殖细胞作为胚胎干细胞的细胞系的特性”日本疾病模型学会记录（Records of the Japanese Society for Dance Modeling）9. 9-14（1993）。

松居靖久: "マウス始原生殖細胞の培養" 組織培養. 19. 176-180 (1993)

Yasuhisa Matsui：“小鼠原始生殖细胞的培养”组织培养 19. 176-180 (1993)。

松居靖久: "c-KitとSl因子の発生過程における発現と機能" 実験医学. 11. 1686-1691 (1993)

Yasuhisa Matsui：“发育过程中 c-Kit 和 Sl 因子的表达和功能”实验医学 11. 1686-1691 (1993)。