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ハロ酸分解性微生物酵素の構造機能相関の解析、環境浄化への応用

卤酸降解微生物酶的构效关系分析及其在环境净化中的应用

基本信息

批准号：
07263233
负责人：
左右田健次
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

L-2-ハロ酸のD-2-ヒドロキシ酸への加水分解反応を解媒するL-2-ハロ酸デハロゲナーゼの反応機構を解析した。ヒドロキシルアミン存在下、基質とインキュベートすると酵素は失活した。クロロ酢酸の存在下で失活した酵素の分子量は失活前に比べて約74増加していた。失活酵素ではAsp10が修飾されていることがN-末端アミノ酸配列分析から明らかになった。失活酵素をリシルエンドペプキダーゼで切断し、Asp10を含むペプチド断片をタンデムMS/MS法で分析したところ、Asp10に対応する部位で73の分子量増加が認められた。L-2-クロロプロピオン酸存在下で失活した酵素では、87の分子量がみられた。観察された分子量増加はAsp10のアスパラギン酸β-ヒドロキシム酸カルボキシルアルキルエステル残基への置換で説明できる。ここにはAsp10、基質、ヒドロキシアミンの3者に由来する部分が含まれており、本酵素反応がAsp10と基質からなるエステル中間体を経由して進行することを示している。X線結晶構造解析の結果、Asp10の近傍にThr14、Arg41、Ser118、Lys151、Tyr157、Ser175、Asn177、Asp180などが存在することが明らかとなった。これらの改変によって、本酵素の機能を改変できるものと期待される。2-ハロ酸のD、L-両異性体に作用するDL-2-ハロ酸デハロゲナーゼ(立体反転型)を用い、D-またはL-2-クロロプロピオン酸を基質としてH^<18>_2O中で反応を行った後、酵素をリシルエンドペプチダーゼまたはトリプシンで分解し、得られたペプチド断片をLC/MS法で分析したが、本酵素への^<18>Oの取り込みは見られなかった。本酵素反応ではエステル中間体は形成されず、溶媒の水分子が直接基質を攻撃して加水分解が起こるものと考えられる。

Lmur2-sulfonic acid D-2-sulfonic acid, water decomposition, anti-dissolvent, Lmur2-acid, acid In the presence of the enzyme, the enzyme is inactivated. In the presence of oxalic acid, the molecular weight of inactivated enzyme was about 74% higher than that before inactivation. Inactivating enzyme, Asp10, modified, modified, purified, N-terminal, N-terminal, acid collocation analysis, amino acid alignment analysis. The inactivating enzyme was isolated from the enzyme, the inactivating enzyme was cut off, the Asp10 was analyzed by MS/MS, the molecular weight of the site was 73, and the molecular weight was added to it. The enzyme was inactivated and the molecular weight was 87 in the presence of Lmurine 2-aminobutyric acid. Check the molecular weight of Asp10 plus the molecular weight of acid β-acid, residue, residue, acid, acid and acid. The reason for this is that some of the factors that cause the disease are Asp10, base Asp10, and so on. This enzyme is used to reverse the activity of ASP10. In this enzyme, it is shown that the temperature in the system is affected by the temperature. The results of X-ray analysis showed that there were significant differences between Thr14, Arg41, Ser118, Lys151, Tyr157, Ser175, Asn177 and Asp180. This enzyme is used to change the temperature, and the enzyme is capable of changing the temperature and anticipation. 2-Acid D, L-body effect, DL-2-, acid, H ^ & lt;18&gt. After the reaction of the enzyme in _ 2O, the enzyme was analyzed by LC/MS method, and the enzyme was analyzed by LC/MS method. In this enzyme, the body is formed in the form of water molecules, and the solvent water molecules are used directly to increase the decomposition of water.