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フィブロネクチンの自己会合ドメインを利用した新機能細胞外超構造の構築

利用纤连蛋白自组装结构域构建新型功能性细胞外超结构

基本信息

批准号：
07241261
负责人：
関口清俊
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

フィブロネクチン(FN)の自己会合ドメインを利用して、任意の蛋白質を細胞外マトリックスに不溶化する新しい技術の開発を行った。我々は、FNのN末端70kD領域とC末端37kD領域を連結した組換え蛋白質(以下、“ミニフィブロネクチン"(miniFN)と呼ぶ)が細胞外マトリックスへのアセンブリー活性を保持していることを既に見いだしている。このminiFNのC末端部にレポーター蛋白質として発光蛋白質エクオリンを連結したキメラ蛋白質の組換え遺伝子を作成し、この組換え遺伝子を培養細胞に導入・発現させた。その結果、このキメラタンパク質はフィブロネクチンと同様に2量体としての細胞によって合成・分泌され、培養細胞の細胞外マトリックスに不溶化されることが判明した。また、このキメラタンパク質の発光活性を測定したところ、この蛋白質は溶液中でも細胞外マトリックスに不溶化された状態でもエクオリンの発光活性を保持していることが確認された。これらの結果は、miniFNのC末端側に連結することにより、様々な機能蛋白質をその生理活性を保持したまま細胞外マトリックスに不溶化できることを示している。この点をさらに確認するため、細胞増殖因子のひとつであるtransforming growth factor(TGF)-αをminiFNとキメラ化した蛋白質の発現ベクターを構築し、培養細胞で発現させた。このキメラ蛋白質は予想通り細胞外マトリックスへのアセンブリー活性を保持しており、さらにTGF-αの細胞増殖促進活性も有していた。今後、このTGF-α/miniFNキメラ蛋白質の機能解析をさらに進める予定である。

The development of new technologies for the use of free protein in extracellular space is under way. The N-terminal 70kD domain of FN and the C-terminal 37kD domain of FN are linked to each other and the extracellular protein activity is maintained. C-terminal part of the miniFN protein is introduced into the cell culture. As a result, it was found that the protein was not soluble in the extracellular matrix of cultured cells. The determination of the photoactivity of the protein in the extracellular matrix in solution confirms that the photoactivity of the protein remains unchanged. The result is that the C-terminal side of the miniFN is linked to the physiological activity of the protein. This is the first time that cell growth factors have been identified and transformed into transforming growth factor(TGF)-α. This protein is expected to maintain its activity in vitro and to promote the proliferation of TGF-α cells. In the future, the functional analysis of TGF-α/miniFN protein will be further developed.