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3量体G蛋白による心筋細胞カリウムチャネル制御の分子機構

三聚体G蛋白调节心肌细胞钾通道的分子机制

基本信息

批准号：
07256209
负责人：
倉智嘉久
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07256209/
关键词：
G蛋白カリウムチャネル分子生物学

项目摘要

G蛋白質βγサブユニット(G_<βγ>とマウスムスカリン性カリウム(K_<ACh>)チャネルの直接的な連関を証明するため以下の実験を行った。マウスK_<ACh>チャネルのクローン(MB-GIRK1)はそのほぼ分子中央に2つの膜貫通想定領域を有し、これらよりそれぞれCおよびN末端側を細胞内側に向けて細胞膜内に存在している。このC末端側にはβアドレナリン受容体キナーゼのG_<βγ>結合部位と相同性を有する部位があるので、MB-GIRK1の第2膜貫通想定領域よりC末端側部分を大腸菌を用いてグルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)融合蛋白質として調整した。これをウシ脳由来のG_<βγ>とin vitroで反応させると両者の結合が認められた。またholo G_<i-1>またはG_<i-2>は、GTPγS存在下にG_<βγ>とGST融合蛋白質の結合を引き起こしたが、GDP共存下では引き起こさなかった。一方、G蛋白質αサブニユットとMB-GIRK1の結合を示唆する結果は得られなかった。またMB-GIRK1C末端のGST融合蛋白質は、G_<βγ>とin vitroで反応させると、G_<βγ>のK_<ACh>チャネルを活性化させる効果を減弱させた。以上のことより、MB-GIRK1C末端にはG蛋白質活性に依存してG_<βγ>と結合する機能が存在すると考えられた。また、モルモット心房筋細胞のK_<ACh>チャネル活性およびキネティックスの細胞内GTP濃度依存性を詳細に検討した。その結果、G蛋白質はチャネルの活性化ゲートには影響せず、活性化ゲートによって活性調節を受けるチャネルの分画を任意の膜電位で増加させることが解かった。したがって、MB-GIRK1C末端とG_<βγ>の結合がこのような様式でK_<ACh>チャネル活性を亢進させるようであるが、G_<βγ>がどのようなK_<ACh>チャネル蛋白質の構造変換を生じてこの現象を誘発するのかはまだ不明で、今後の検討が必要である。

G protein βγ<ACh>MB-GIRK1 <ACh>is a membrane penetration domain that exists in the center of the molecule and in the inner part of the cell at the N terminal. The C-terminal part of MB-GIRK1 is the second membrane penetration region of the receptor, and the G-binding site of MB-GIRK1 is the second membrane penetration region of MB-GIRK1. The origin of this phenomenon is G_(βγ) in vitro. holo G_<i-1>G<i-2>_, the binding of G_<βγ> and GST fusion protein in the presence of GTPγS, and the coexistence of GDP. The binding of a protein alpha to MB-GIRK1 was demonstrated. The GST fusion protein at the C-terminal of MB-GIRK 1 was activated by G_<βγ> in vitro and G_<β γ> in <ACh>vitro The C-terminal of MB-GIRK1 is dependent on G protein activity and has a function of binding to G protein. The intracellular GTP concentration-dependence of K-cell activity and K-cell activity in atrial muscle <ACh>cells was investigated in detail. As a result, the activation of G protein is affected by the activation of G protein, and the activation of G protein is regulated by the activation of G protein. MB-GIRK1 C-terminal binding to G_<βγ> is the key to the activation of K<ACh>_(2) protein<ACh>.