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心臓由来株化細胞におけるイオンチャネルの発現に関する研究

心脏来源细胞系离子通道表达的研究

基本信息

批准号：
07266222
负责人：
大地陸男
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット胚心臓由来の株化筋細胞H9c2の分化に伴うイオンチャネルの発現を、平成6年度にL型Caチャネルについて特異抗体による検出とパッチクランプ法により調べたが、本年度はこの標本での研究が遅れていた外向きKチャネルについてホールセル・クランプ型のパッチクランプ法で検討した。外向きK電流はCa電流よりも遙かに大きな電流でH9c2での主な電流であった。未分化の筋芽細胞と多核に分化した筋管細胞で、脱分極ステップパルスでK電流を誘発した。単核の筋芽細胞では、速い上昇、遅い減衰と保持電位の脱分極によって不活性化される電位依存性外向きK電流(I_<KV>)が活性化された。このI_<KV>はTEAによってIC_<50>、1.9mMで抑制された。筋管細胞でもほぼ同様のI_<KV>が電流密度の僅かの現象を伴って存在した。さらに筋管細胞では、再分極で遅い尾電流に伴われる別のK手電流が生じた。この遅いK電流は、H9c2における新たな発見であって、無Ca溶液やピペットからの10mMのEGTAの適用による消失から、Ca活性化K電流(I_<KCA>)と結論された。I_<KCA>の阻害剤カリブドトキシンとアパミンは最大上濃度の100nMで、全体のI_<KCA>を各々単独で57.0と43.0%抑制し、同時適用で完全な抑制をもたらした。筋管細胞における全K電流に対するI_<KV>とI_<KCA>の割合は半々に近かった。I_<KV>の性質とI_<KCA>の発現は、クローン化されたH9c2細胞株が、外向きKチャネルの性質に関して骨格筋に近いことを示す。培養液中の牛胎児血清の濃度を、従来の10%から数%に減少すると細胞の分化が促進される一方、I_<KCA>の密度は減少する傾向があった。Kチャネルの成果は論文を投稿中であるが、チャネル発現の調節およびKチャネル関するチャネルタンパクの分子生物学的な同定が今後の課題となった。

The development of differentiation of H9c2 cells from embryonic heart origin, the detection of L-type Ca-type specific antibodies in Heisei 6, and the study of this year's Li Ke were investigated by the method of extroversion. Outward current Ca current Undifferentiated tendon cells and multinucleated tendon cells are induced by depolarization. In the nucleus, the cell is activated by a potential-dependent outward K current (I_ ), which increases, decreases, and <KV>maintains the polarization of the potential. This I_<KV>TEA inhibitor is IC_<50>, 1.9 mM inhibitory. There <KV>is a phenomenon that the current density of muscle cells is different from that of muscle cells. In addition, the muscle tube cell is divided into two parts, namely, the tail current and the hand current. K current, H9c2 current, Ca activation K current<KCA>. The <KCA>maximum concentration of I_is 100nM, and the total I_<KCA>is 57.0%, 43.0% and 43.0% respectively. All K currents in the muscle <KV>cells are connected to each other<KCA>. The properties of I<KV>_<KCA>and its expression in H9c2 cell line were shown. The concentration of fetal bovine serum in the culture medium decreased by 10% or several %, and the differentiation of the cells was promoted. The density of I_decreased<KCA>. The regulation of gene expression in the process of gene expression and the identification of gene expression in the process of gene expression