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無細胞系における収縮環の形勢とその分子機構の解析

无细胞系统中收缩环的形状及其分子机制分析

基本信息

批准号：
07267205
负责人：
岸本健雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、全真核細胞に共通してM期の全てをcdc2キナーゼが統御していることに着目し、収縮環形成をin vitroでひきおこすことができる無細胞系を開発して、収縮環の形成機構をM期の進行との関連から解明することにある。本年度は、以下の成果を得た。1.無細胞系における収縮環形成の試み:アフリカツメガエル卵抽出物由来の、M期と間期の交互交替を実現できる無細胞系cycling extractsを用いて、収縮環の形成のもととみなされる微小管とアクチンとの相互作用の変動をまず解析した。しかし、cycling extracts中にはアクチンは十分量あり、かつ紡錘体は形成されうるにもかかわらず、細胞周期に応じた微小管とアクチンとの相互作用の変動は検出できなかった。こうした相互作用のためには、細胞表層の存在が必要であると考えられる。そこで、ヒトデ卵から単離した表層をカバーグラスに付着させ、これに単離分裂装置を含むアフリカツメガエル卵cycling extractsを加えることにより、M期終了時に収縮環様のアクチンフイラメント束を無細胞系で形成しうるかを、現在検討中である。2.分裂装置微小管の動態制御:分裂装置微小管の制御には、MAP4のcdc2キナーゼによるリン酸化が関与していることをこれまで明らかにしてきた。そこで、in vivoでMAP4のどの部位がcdc2キナーゼによってリン酸化されるのかを、in vivoでリン酸化されたMAP4とin vitroでcdc2キナーゼによってリン酸化したMAP4とについて、2次元フォスフォペプチド・マッピングを比較することにより検討した。その結果、少なくともMAP4のPro-rich領域中のSer696とSer787がリン酸化部位であることを同定できた。こうしたMAP4のリン酸化部位の同定が星状体微小管の制御と分裂面の決定にいかにかかわるかは、今後の課題である。

The purpose of this study is to explore the mechanism of the formation of contractive rings in vitro, and to clarify the relationship between the formation of contractive rings and the progress of M phase. The following results were achieved during the year. 1. The study on the origin of cell-free cycle extracts and the interaction between M phases; In the cell cycle, the interaction between the microtubule and the spindle is reversed. The interaction between the two is necessary for the existence of the cell surface. In addition, the cell cycle extracts were added at the end of phase M, and the cell-free system was formed at the end of phase M. 2. Dynamic control of split device micro-tube: control of split device micro-tube, MAP4 cdc2 c MAP4 in vivo and MAP4 in vitro is the second most important component of MAP4 in vivo. Ser696 and Ser787 in the Pro-rich domain MAP4: Determination of Acidification Position and Control of Astroid Microtubes and Determination of Splitting Surface