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cdc2・サイクリン複合体の核移行の分子機構

CDC2/细胞周期蛋白复合物核转位的分子机制

基本信息

批准号：
05252210
负责人：
岸本健雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

サイクリンB・cdc2複合体(cycB・cdc2)は全真核細胞に共通のM期誘起蛋白質キナーゼである。ヒトデ未成熟卵ではこのcycB・cdc2は不活型前駆体として細胞質中に局在し、活性型への転換に際して核移行することを見出している。そこで本年度は、活性型への転換と核移行開始との関連を解析し、以下の成果を得た。1.cycB・cdc2の活性化因子であるcdc25フォスファターゼのヒトデ・ホモログのcDNAをクロン化した。大腸菌で過剰発現させた蛋白質を抗原として抗cdc25抗体を得、抗体カラムを作製して、ヒトデ卵から活性型のcdc25フォスファターゼを精製した。2.ヒトデ卵内におけるcycB・cdc2の存在様式を検討したところ、未成熟卵ではほとんどがdetergent不溶性画分に存在するのに対し、その活性化にともないかなりが可溶性画分に移ると判明した。3.未成熟卵から不溶性画分を得、それに精製したcdc25フォスファターゼを作用させたところ、cycB・cdc2が可溶化されてくると判明した。上述の結果から、cycB・cdc2の核移行開始にあたっては、まずこの複合体がcdc25フォスファターゼによって活性化される際にdetergent不溶性細胞骨格から解離し、それによって核移行が可能になると考えられる。このあと、cycB・cdc2は自分自身あるいは細胞質中の他の因子をリン酸化することによって核移行が実現すると予備的に判明しているので、現在、この点の分子的裏づけを得るべく解析中である。いずれにせよ、cycB・cdc2の上述した可溶化とこのキナーゼによるリン酸化の両方が、この複合体の核移行のタイミングをM期開始時特異的に規定しているといえる。

The cycB·cdc2 complex (cycB·cdc2) is an M-phase inducible protein common to all nuclear organisms. CycB·cdc2 in immature eggs is found in the cytoplasm of inactive precursors and in the cytoplasm of active embryos. This year, we have analyzed the relationship between the replacement of active types and the beginning of nuclear migration, and achieved the following results. 1. CycB·cdc2 activation factor cdc25-cdc2 activation factor cdc2 activation factor cdc25-cdc2 activation factor cdcdc2 activation factor cdc2 activation factor cdcdc2 activation factor cdcdcactivation factor cdc2 activation factor cdcdcactivation factor cdcdcactivation factor cactivation factor cd2 activation factor cdcactivation factor cactivation factor cdcactivation factor E. coli production of protein antigen, anti-cdc 25 antibody production, antibody production, protein production and purification 2. The existence of cycB·cdc2 in immature eggs was investigated. The existence of detergent insoluble fraction in immature eggs was investigated. The activity of cycB·cdc2 was determined. 3. Immature eggs are insoluble and soluble. The above results show that the complex of cycB·cdc2 is not soluble in the soluble cytoskeleton, but is soluble in the soluble cytoskeleton. In addition, cycB·cdc2 can separate itself from other factors in the cytoplasm. In addition, nuclear migration can be realized in preparation for identification. In addition, it can be analyzed in detail. In addition, the above-mentioned solubilization of cycB·cdc2 and the undetermined acidification of this complex, as well as the nuclear migration of this complex, are specifically regulated at the beginning of Phase M.