Meiotic G2/M-phase transition by maturation-inducing hormonal signaling

点击翻译按钮获取中文摘要

本計画では、ヒトデの卵成熟誘起ホルモンである1-methyladenine (1-MeAde) の卵表受容体の分子実体を同定し、卵成熟誘起ホルモンによるG2/M期移行シグナリングの全容を全動物で最初に判明させることを目指している。事前研究から、この卵表受容体と期待されるGPCR (G protein-coupled receptor) のcDNAを一つに絞ることができているので、このcDNAがコードするタンパク質（候補GPCR）がまさに目指している分子であることを確証したい。そのために、本年度は以下の実験を実施した。(1) 昨年度に引き続き、候補GPCRの細胞内機能ドメイン（C末テイル部；昨年度はリン酸化部位、今回は別途にGbg結合部位）に対する抗体による機能阻害を目指した（内在性タンパクの認識は確認済み）。卵内に微小注射した抗体は対照実験に比べてわずかに阻害効果を示したので、それを卵表層に集積させる道具を開発しようとした。しかし、この道具はmRNAを卵内で発現させる必要があり、十分な効果を発揮しなかった。目下、別の方策を模索中である。(2) 候補GPCRのN端側細胞外領域では、少なくとも２ヶ所（SEAとGPSの両ドメイン）でのペプチド切断が予想される。そこで最N末端とSEAとの間を抗原とする”N1抗体”と、SEAとGPSとの間を抗原とする”N2抗体”を作製して解析した。その結果、予想通りに断片化が起こり、しかも、その断片の少なくとも一部は、未切断細胞外領域と複合体を形成して受容体として機能している可能性が示唆された。(3) そこで、N1抗体とN2抗体のそれぞれを海水中に単離したヒトデ卵に卵外から作用させることで、1-MeAdeの効果を抑制あるいは昂進するかを検討した。そうしたところ、N1抗体は無効であったが、N2抗体の方はかなりの阻害効果（約50%）を示した。