权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Meiotic G2/M-phase transition by maturation-inducing hormonal signaling

通过成熟诱导激素信号传导进行减数分裂 G2/M 相转变

基本信息

批准号：
20K06618
负责人：
岸本健雄
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本計画では、ヒトデの卵成熟誘起ホルモンである1-methyladenine (1-MeAde) の卵表受容体の分子実体を同定し、卵成熟誘起ホルモンによるG2/M期移行シグナリングの全容を全動物で最初に判明させることを目指している。事前研究から、この卵表受容体と期待されるGPCR (G protein-coupled receptor) のcDNAを一つに絞ることができているので、このcDNAがコードするタンパク質（候補GPCR）がまさに目指している分子であることを確証したい。そのために、本年度は以下の実験を実施した。(1) 昨年度に引き続き、候補GPCRの細胞内機能ドメイン（C末テイル部；昨年度はリン酸化部位、今回は別途にGbg結合部位）に対する抗体による機能阻害を目指した（内在性タンパクの認識は確認済み）。卵内に微小注射した抗体は対照実験に比べてわずかに阻害効果を示したので、それを卵表層に集積させる道具を開発しようとした。しかし、この道具はmRNAを卵内で発現させる必要があり、十分な効果を発揮しなかった。目下、別の方策を模索中である。(2) 候補GPCRのN端側細胞外領域では、少なくとも２ヶ所（SEAとGPSの両ドメイン）でのペプチド切断が予想される。そこで最N末端とSEAとの間を抗原とする”N1抗体”と、SEAとGPSとの間を抗原とする”N2抗体”を作製して解析した。その結果、予想通りに断片化が起こり、しかも、その断片の少なくとも一部は、未切断細胞外領域と複合体を形成して受容体として機能している可能性が示唆された。(3) そこで、N1抗体とN2抗体のそれぞれを海水中に単離したヒトデ卵に卵外から作用させることで、1-MeAdeの効果を抑制あるいは昂進するかを検討した。そうしたところ、N1抗体は無効であったが、N2抗体の方はかなりの阻害効果（約50%）を示した。

In this study, the molecular identity of egg surface receptors induced by 1-methyladenine (1-MeAde) was determined, and the G2/M phase transition of egg maturation induced by 1-methyladenine was initially identified. Prior studies have confirmed that the cDNA of the GPCR (G protein-coupled receptor) is expected to be cloned into the genome of the candidate GPCR. This year, the following measures have been implemented: (1)In the past year, the intracellular function of candidate GPCRs (C terminal region; yesterday's reverse acidification region; today's reverse Gbg-binding region) has been identified. In vivo microinjection of antibodies against the development of anti-inflammatory effects in the egg surface layer It is necessary for the mRNA to be expressed in the egg. At present, there is no other way to solve the problem. (2)The N-terminal extracellular domain of the candidate GPCR is open to all possible candidates. The "N1 antibody" between the N-terminal and SEA and the "N2 antibody" between SEA and GPS were prepared and analyzed. As a result, the possibility of fragmentation, partial fragmentation, and uncut extracellular domain complex formation was demonstrated. (3)N1 antibody and N2 antibody are isolated from the egg in seawater, and the effect of 1-MeAde is inhibited. N1 antibody has no effect, N2 antibody has no effect (about 50%)