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無細胞系における収縮環の形成とその分子機構の解析

无细胞系统中收缩环的形成及其分子机制分析

基本信息

批准号：
08259204
负责人：
岸本健雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、全真核細胞に共通してM期の全てをcdc2キセナーゼが統御していることに着目し、細胞質分裂における収縮環の形成機構をM期の進行との関連から解明することにある。本年度は、以下の成果を得た。1.Rho蛋白質:収縮環の形成にあたって、Rhoが分子スイッチとして機能していることが判明しつつある。そこで、細胞周期の進行に応じて、収縮環の形成されるM期の終期特異的にRhoの活性が変化するのかどうかを確かめることを試みた。このために、アフリカツメガエル卵抽出物由来の無細胞系で細胞周期を進行させることができる“cycling extracts"を活用した。大腸菌に産生させたGST-Rhoをcycling extractsに加え、RhoのGDP結合型とGTP結合型との間の転換をもたらす活性の変化を細胞周期の進行に応じて追跡したところ、M期に応じたRhoの活性化を検出することができた。現在、膜分画へ取り込まれるように修飾を受けることができるRhoをバキュロウイルスで産生して、Rhoの活性変化の検出を再確認中である。今後は、cdc2キナーゼからRhoに至る経路の解析に向かいたい。2.無細胞系における収縮環形成の試み:ヒトデ卵から単離した表層をカバーグラスに付着させ、これに上述のアフリカツメガエル卵cycling extractsおよび単離分裂装置を加えるこにより、M期終了時に収縮環様のアクチンフィラメント束を無細胞系で形成しうるかを、現在検討中である。

The purpose of this study is to clarify the relationship between the mechanism of cytokinesis and the progress of M phase. The following results were achieved during the year. 1. Rho protein: the formation of condensed rings, Rho molecular function, identification, etc. The activity of Rho in the cell cycle is determined by the cell cycle progression, cycle formation, and terminal phase specificity. The origin of egg extracts is cell-free and the cell cycle is carried out. E. coli produces GST-Rho cycling extracts, Rho GDP-binding forms, and GTP-binding forms. Now, the membrane is divided into two parts: the first part is modified, the second part is generated, and the third part is activated. From now on, cdc2 2. Cell line free loop formation test: The above mentioned cell cycle extracts are added to the cell cycle at the end of phase M. Cell line free loop formation test is conducted at the end of phase M