細胞接触による細胞運動制御に関与するチロシンリン酸化膜蛋白の遺伝子クローニング

通过细胞接触控制细胞运动的酪氨酸磷酸化膜蛋白的基因克隆

• 批准号: 07273245
• 负责人: 榎本 平
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273245/
• 关键词: 細胞運動; チロシンリン酸化; 細胞接触; 増殖因子; 膜運動

正常細胞と癌細胞の大きな違いの1つはプラスチックdish上での増殖態度にはっきり現われる。正常細胞は、まばらな状態では盛んに動き回りながら、分裂を繰り返すが、細胞同士の接触と共にお互いの細胞運動を停止し、増殖を停止する。一方、癌細胞では、細胞接触後も細胞運動、増殖とも停止することなく増え続ける。本研究では、細胞運動に高感受性の細胞を用いて細胞接触後の細胞運動-細胞増殖停止機構をさぐり、関連する蛋白遺伝子を同定することを目指した。細胞運動(Membarane Ruffling)の測定は増殖因子刺激後、顕微鏡下で写真を撮り、単位面積当たりのrufflingの数を測定した。リン酸化蛋白の解析は細胞を^<12>P無機リン酸でラベルし、増殖因子刺激後、cell lysateを作り、1次元、2次元蛋白電気泳動法で、リン酸化蛋白を調べた。また、抗ホスホチロシン抗体を用いて特異的にチロシン残基がリン酸化された蛋白を検出した。TPAによる細胞癌化に高感受性のBalb/c3T3TR4細胞が、細胞接触による増殖停止後も自発的な膜運動能(Membrane Ruffling)を持っていることを見い出した。この性質はPDGF、やInsulin、FGFなどチロシンキナーゼ型受容体をもつ増殖因子による刺激で強く増強された。この変異株と親株Balb/c3T3A1-1-1との比較で生化学的に分析したところ、膜蛋白質のいくつかにチロシンリン酸化の変異が見い出された。これらは、p38、p66、p85、p160、であった。そのうち、p160は親株では、PDGFで強くチロシンリン酸化されるが、TR4ではわずかしかリン酸化が認められなかった。この蛋白を部分精製し、解析したところα型のPDGF受容体そのものであることが判明した。

Normal cells and cancer cells are divided into different types of cells. Normal cells are in normal state, and the state of normal cells is moving and moving, dividing and returning, cells are in contact with each other, and cell movement is stopped, and reproduction is stopped. On the one hand, when cancer cells come into contact, cell movement and proliferation will stop and the growth will stop. In this study, the mechanism of cell movement-cell proliferation cessation after contact with cells was used to detect the high sensitivity of cell movement. Cell motility (Membarane Ruffling) was measured by measuring the number of ruffling cells after stimulation with proliferative factors and taking pictures under a microscope. The analysis of リン acidified protein is done by cell を^<12> P inorganic リン acid でラベルし, after stimulation of proliferative factors, cell lysate is used, 1-dimensional, 2-dimensional protein electrophoresis method is used, and the リン acidated protein is adjusted.また, anti-ホスホチロシン antibody をいて-specific にチロシン residue がリン acidified された protein を検出した. TPA is a highly susceptible Balb/c3T3TR4 cell that becomes cancerous, and the membrane motility (Membrane Ruffling) of the cells is maintained after the cell contact stops proliferation. The properties of PDGF, Insulin, and FGF are the receptor type receptors and the proliferative factors are stimulated and stimulated. Comparative biochemical analysis of the heterogeneous strain and the parent strain Balb/c3T3A1-1-1したところ, membrane protein のいくつかにチロシンリン acidification の変different が见い出された.これらは、p38、p66、p85、p160、であった.そのうち, p160 parent strain では, PDGF でstrong くチロシンリン acid Chemical acidification, TR4 acidification and TR4 acidification. The protein was partially purified and the α-type PDGF receptor was analyzed and identified.