核局在プロテインキナーゼN-rafの核内信号伝達における役割

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1.研究目的:信号伝達におけるRAF-1キナーゼの役割の研究過程で、抗RAF-1モノクローナル抗体が共通に認識する分子量56Kdの核内タンパク質を見出した。免疫スクリーニングによって得られたcDNAクローンの解析からこれが新たなプロテインキナーゼであることが示唆されたため、本年度はこのp56の全一次構造の確認と細胞核における機能を探ることを目的とした。2.研究成果:当初得られていたキナーゼドメインを含むcDNAクローンは分子量が合致しないことと、抗体が認識するエピトープ領域でRAF-1と30%程の相似性しか示さなかったため偽陽性と判定した。新たな免疫スクリーニングによりエピトープ領域で50%の相似性を示すcDNAクローンpZ-8が得られた。900bpのpZ-8 cDNAは246aaのORFを有し、その配列中にGβ又はWD-40リピートと呼ばれる繰返し構造を5回持つことが判明した。更に最近その全長ORFを持つヒトcDNAクローンpZ-88を分離したところ、全長約500aa残基中に8回のWD-40リピートを持つことが確認された。WD-40タンパク質群は酵母からヒトに至る真核生物でこれまで25種以上知られ、信号伝達、RNAプロセシング、転写と修復、発生、輸送、細胞周期制御など重要な機能に関わることから最近注目されている。pZ-88のWD-40リピート配列は新規なものであるが、このcDNAが抗体の認識するp56と合致するか否かを現在検討中である。またこのpZ-88に対応する遺伝子のヒト染色体上の位置は2q_<14-21>であることが判明した(国際医療センター高井節夫博士との共同研究による)。本研究課題は本年度が初年度であり、上記の成果は未だ論文として発表するに至っていないが、関連するプロテインキナーゼについての発表論文を別項に示す。