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WD-40リピートを持つ核内蛋白質N-raf p56の機能

具有 WD-40 重复序列的核蛋白 N-raf p56 的功能

基本信息

批准号：
08274213
负责人：
清水憲二
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274213/
关键词：
WD-40リピート非マトリックスコラーゲン核蛋白質

项目摘要

[目的]RAF-1をめぐる信号伝達系の研究過程で抗RAF単クローン抗体を用いた免疫スクリーニングによって、WD-40リピート構造を8回含む新規な核蛋白質のcDNAを見出した。本研究はこの新しいWD-40核蛋白質の生理的機能を明らかにすることを目的とする。[研究成果]今年度初期の段階で得られたcDNAクローンはMW55kDaのWD-40蛋白質をコードすると見られた。ところがcDNAの3′側に終止コドンが出現せず、コーディング領域はもっと大きいと予想された。そこでRACE法を併用したところ、全長4602bpのcDNAを得ることができ、うち4008bpがORFで、アミノ酸残基1336、推定分子量146kDaという大きな蛋白が全長であることが確定した。更に興味深いことに、WD-40リピート8個を含むN端側ドメインの下流に1.2kbp(400aa)に及ぶコラーゲン様配列(Gly-Pro-X)nを見出した。よりC端側にもGly,Pro,Argに富む5回の大きなリピート配列が存在する。このようにWDC-146と仮に名付けた本蛋白質はこれまで全く知られていなかったユニークな構造を持つことが判明した。本遺伝子のラット各臓器における発現を調べたところ、約5kbのmRNAが広汎な組織で弱く発現しており、特に精巣、次いで胸腺で高い発現が見られた。本遺伝子はヒトでは2q14.2〜21.1にマップされ既知の遺伝子との相同性はない。また本遺伝子のWD-40リピートのドメインのみをマウスNIH3T3細胞で発現させたところ、10-20%の細胞が多核となり、さらに培養後期に一斉にアポトーシス様の細胞死を起こすこと、細胞表面に多数の小胞構造を誘導することなど興味深い知見が得られつつある。現在本蛋白質のC端側ドメインをGST融合蛋白質として大腸菌で発現させることができたので特異的な抗体を得る努力を続けている。

[Objective]RAF-1 gene signaling system research process, anti-RAF gene antibody use in immune system research, WD-40 gene structure, 8-fold containing new nuclear protein cDNA discovery. This study aims to clarify the physiological function of WD-40 nuclear protein. [Results] Early in the year, the cDNA sequence was identified for MW55kDa WD-40 protein. The 3′ side of the cDNA is terminated. The full length cDNA of 4602bp was obtained by using RACE method, and the ORF of 4008bp was determined to have 1336 amino acid residues and the estimated molecular weight of 146kDa. In addition, the WD-40 has eight downstream terminals, 1.2kbp(400aa) and a few downstream terminals (Gly-Pro-X). C-side Gly,Pro,Arg, rich in 5-loop, large in size and configuration. WDC-146 is a protein that has been identified by its structure. The expression of the mRNA in each organ of this gene was modulated, and the mRNA of about 5kb was expressed in a wide range of tissues, such as weak tissue, special tissue, and high thymus. This article is about 2q14.2 ~ 21.1. In addition, 10-20% of NIH 3T3 cells were found to be multinucleated, and in late culture, most of the cell structures on the cell surface were induced. Now, the C-terminal region of this protein is a GST-fusion protein, which has been developed in E. coli, and a specific antibody has been developed.