WD-40リピートを持つ核内蛋白質N-raf p56の機能

具有 WD-40 重复序列的核蛋白 N-raf p56 的功能

• 批准号: 08274213
• 负责人: 清水 憲二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274213/
• 关键词: WD-40リピート; 非マトリックスコラーゲン; 核蛋白質

[目的]RAF-1をめぐる信号伝達系の研究過程で抗RAF単クローン抗体を用いた免疫スクリーニングによって、WD-40リピート構造を8回含む新規な核蛋白質のcDNAを見出した。本研究はこの新しいWD-40核蛋白質の生理的機能を明らかにすることを目的とする。[研究成果]今年度初期の段階で得られたcDNAクローンはMW55kDaのWD-40蛋白質をコードすると見られた。ところがcDNAの3′側に終止コドンが出現せず、コーディング領域はもっと大きいと予想された。そこでRACE法を併用したところ、全長4602bpのcDNAを得ることができ、うち4008bpがORFで、アミノ酸残基1336、推定分子量146kDaという大きな蛋白が全長であることが確定した。更に興味深いことに、WD-40リピート8個を含むN端側ドメインの下流に1.2kbp(400aa)に及ぶコラーゲン様配列(Gly-Pro-X)nを見出した。よりC端側にもGly,Pro,Argに富む5回の大きなリピート配列が存在する。このようにWDC-146と仮に名付けた本蛋白質はこれまで全く知られていなかったユニークな構造を持つことが判明した。本遺伝子のラット各臓器における発現を調べたところ、約5kbのmRNAが広汎な組織で弱く発現しており、特に精巣、次いで胸腺で高い発現が見られた。本遺伝子はヒトでは2q14.2〜21.1にマップされ既知の遺伝子との相同性はない。また本遺伝子のWD-40リピートのドメインのみをマウスNIH3T3細胞で発現させたところ、10-20%の細胞が多核となり、さらに培養後期に一斉にアポトーシス様の細胞死を起こすこと、細胞表面に多数の小胞構造を誘導することなど興味深い知見が得られつつある。現在本蛋白質のC端側ドメインをGST融合蛋白質として大腸菌で発現させることができたので特異的な抗体を得る努力を続けている。

[objective] the RAF - 1 を め ぐ 伝 る signal is の research process で resistance RAF 単 ク ロ ー を ン antibody with い た immune ス ク リ ー ニ ン グ に よ っ て, WD - 40 リ ピ ー を ト structure contains 8 back む new rules な nuclear protein の cDNA を shows し た. This study aims to explore the <s:1> physiological functions of the new <s:1> WD-40 nuclear protein を, ら にする にする とを とを and とする. [results] this year early の Duan Jie で have ら れ た cDNA ク ロ ー ン は MW55kDa の WD - 40 protein を コ ー ド す る と see ら れ た. と こ ろ が cDNA の 3 'side に termination コ ド ン が appear せ ず, コ ー デ ィ ン グ field は も っ と big き い と to think さ れ た. を そ こ で RACE method using し た と こ ろ, total length of 4602 bp の cDNA を have る こ と が で き, う ち 4008 bp が ORF で, ア ミ ノ acid residue 1336, presumption of molecular weight 146 kda と い う big き な protein が span で あ る こ と が determine し た. More interests deep い に こ と に, WD - 40 リ ピ ー ト contains eight を む N end side ド メ イ ン の obscene に 1.2 KBP (400 aa) に and ぶ コ ラ ー ゲ ン others with column (Gly - Pro - X) N を see out し た. Youdaoplaceholder0 よ on the c-end side に に Gly,Pro,Argに rich む5 rounds <s:1> large なリピ なリピ ト ト が the が configuration が exists する. こ の よ う に WDC - 146 と 仮 に name pay け た this protein は こ れ ま で く all know ら れ て い な か っ た ユ ニ ー ク な tectonic を hold つ こ と が.at し た. This heritage 伝 son の ラ ッ ト each viscera に お け る 発 now を adjustable べ た と こ ろ, about 5 KB の mRNA が hiroo generic な organization で weak く 発 now し て お り, に 巣, time い で thymus で high い 発 が now see ら れ た. It is known that the 伝 sub-items of this cultural heritage are similar to と な な. ま た this heritage 伝 son の WD - 40 リ ピ ー ト の ド メ イ ン の み を マ ウ ス NIH3T3 cells で 発 now さ せ た と こ ろ, 10-20% の cell が multi-core と な り, さ ら late に cultivate に a 斉 に ア ポ ト ー シ ス others の cell death を こ す こ と に most の small cell structure, cell surface を induced す る こ と な ど tumblers deep い knowledge が ら Youdaoplaceholder0 れ ある ある. Now this protein の C end side ド メ イ ン を GST fusion protein と し て coliform で 発 now さ せ る こ と が で き た の で specific antibody hardwork る を な を 続 け て い る.

项目成果

Yoshitaka,T.: "Mutations of E2F-4 Trinucleotide Repeats in Colorectal Cancer with Microsatellite Instability." Biochem.Biophys.Res.Commun.227. 553-557 (1996)

Yoshitaka,T.：“结直肠癌中 E2F-4 三核苷酸重复突变与微卫星不稳定性。”

清水憲二: "Rasスーパーファミリーと癌細胞の増殖" 呼吸. 15(10). 1142-1148 (1996)

Kenji Shimizu：“Ras 超家族和癌细胞增殖”呼吸 15(10)。

清水憲二(分担): "がん研究の最前線" 第11回「大学と科学」公開シンポジウム組織委員会編(クバプロ) (印刷中), (1997)

Kenji Shimizu（撰稿人）：《癌症研究的最前沿》第11届“大学与科学”公共研讨会组委会编辑（Kubapro）（正在出版），（1997年）