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ヒト癌におけるミスマッチ修復遺伝子欠損の分子病態

人类癌症错配修复基因缺陷的分子发病机制

基本信息

批准号：
10165218
负责人：
清水憲二
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【緒言】本研究では、新規に創案した遺伝子全領域同時SSCP法などの解析法を用いて、大腸癌や胃癌などのうち遺伝的不安定性を示すものを中心としてミスマッチ修復機構の欠損とその標的遺伝子変異への効果、修復欠損を起こす原因となった初発遺伝子の異常はどのようなものがなどを明らかにすることを目的とした。【方法】1,研究検体の確保のため、今までに約1,000例の腫瘍/正常組織を含む岡山大学腫瘍バンクを設立した。2,微小な遺伝子異常検出法として遺伝子全領域同時SSCP法を開発し、癌に関係する遺伝子の異常解析を行った。【結果】これまでの本研究により、マイクロサテライトの不安定性(MI+)を示す胃癌と大腸癌の約37%に転写活性化因子で癌遺伝子ともなりうるE2F4のエキソン内マイクロサテライト変異を見い出した。またE2F4変異を持つ癌の80%以上が修復遺伝子であるhMSH3のエクソン内に1塩基フレームシフト変異を持つことを明らかにし、これらの癌ではE2F4遺伝子がkMSH3遺伝子の関与するミスマッチ修復機構の欠損の標的であることを初めて解明した。本年度の研究で、変異型E2F4遺伝子をNIH3T3細胞で発現させると著明な増殖促進が見られることを確認した。これらhMSH3,E2F4両遺伝子の変異を遺伝性非腺腫性大腸癌(HNPCC)と散発性大腸癌とで比較したところ、HNPCCではこれらの変異が有意に低く、また変異の形式が大きく異なっていた。敗発性のMI+癌における修復遺伝子欠損変異の成因を解明するために、DNAの修復と複製に関わるDNAポリメラーゼεと増殖細胞核抗原(PCNA)の両遺伝子の癌特異的変異を検索した。DNAポリメラーゼεに関しては、その校正機能を担う3′-エキソヌクレアーゼドメインを構成する7個のエキソンとイントロン構造をまず明らかにし、変異検索を行ったところ、このドメイン内にアミノ酸置換を伴う遺伝的多型を検出した。この多型は癌では約50%の頻度で検出されるが、他常人では20%以下であったことから、癌化に対する高リスク因子となりうることが示唆された。またPCNA逍伝子に関しては、RT-PCR産物を全領域同時SSCP法で解析し、数例の原発肺癌において共通な癌特異的変異を示唆する結果を得た。PCNAでは遺伝子レベルにおける確認がなされていないため未確定であるが、これらの知見はDNAの複製・修復に重要な役割を果たすDNAポリメラーゼεやPCNAの微小な遺伝子異常が癌化の前提条件としてのゲノム不安定性に関与する可能性を示すものとして、興味ある結果であると考えられる。

[Introduction] This research is based on the analysis method of the new regulations and the establishment of the whole field of simultaneous SSCP method. Uncertainty of colorectal cancer, stomach cancer, and gastric cancer The effect of repairing the damage caused by the damage caused by the repair mechanism, and the cause of the damage caused by the repair mechanismった初発缝子の无はどのようなものがなどを明らかにすることをpurposeとした. [Method] 1. Research on Okayama University's Tumor/Normal Tissue Containing Tumor and Infection System of approximately 1,000 cases. 2. The method of detecting minor abnormality and abnormality of the abnormality of the abnormality of the abnormality of the abnormality of the abnormality are detected in the whole field at the same time. [Results] In this study, there were approximately 37 gastric and colorectal cancers that were unstable (MI+) in this study. %に転WRITE ACTIVATING FACTOR でCancer Legacy 伝子ともなりうるE2F4のエキソン内マイクロサテライト変different を见い出した.またE2F4 is different and more than 80% of the cancer cells are repaired. hMS H3のエクソン内に1塩组フレームシフト変different をhold つことを明らかにし、これらの Cancer ではE2F4 伝子がkMSH3 伝子の关与すThe damage caused by the るミスマッチ repair organization is the first of the であることをfirst めて clarification した. In this year's research, it was confirmed that the heterogeneous E2F4 gene was detected in NIH3T3 cells and that the proliferation promotion was confirmed. hMSH3,E2F4 is the difference between hereditary non-adenomatous colorectal cancer (HNPCC) and sporadic colorectal cancer.でCompare したところ, HNPCC ではこれらの変different がmeaningful にlow く, また変different のform が大きくdifferent なっていた. Corruption of MI+cancer repair and repair of the cause of the defect, DNA repair and replicationわるDNA ポリメラーゼεとproliferating cell nuclear antigen (PCNA) の両缝子のcancer-specific 剉different を検SO した. DNA Novel Correction Function 3′ -エキソヌクレアーゼドメインを composed of 7 pieces of のエキソンとイントロンstructuralをまず明らかにし、変一検SOを行ったところ、 The multi-type を検出した of the このドメイン内にアミノacid replacement を accompanied by the remaining 伝. The frequency of multi-type cancer is about 50%, and the frequency of other cancers is less than 20% in ordinary people.あったことから, cancerous に対する高リスクfactor and となりうることが说円された. The PCNA was analyzed by the SSCP method in all areas, and the RT-PCR products were analyzed by the SSCP method at the same time. Several cases of lung cancer were analyzed and the cancer-specific differences were obtained. PCNAでは缝子レベルにおけるconfirmedがなされていないためundeterminedであるが、It is important to know how to copy and repair DNAーゼεやPCNA is a prerequisite for the development of cancer due to abnormality of the micro-remnants and is uneasy Qualitative test, possibility test, and interest test result test.