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がん遺伝子産物の機能とそのカスケードの解析

癌基因产物及其级联的功能分析

基本信息

批准号：
01015075
负责人：
清水憲二
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.抗RAF抗体:大腸菌で発現させ、精製したcーRAF蛋白の一部(31kd)を抗原として、抗RAFマウスモノクローナル抗体を作成した。得られた14種の抗体は免疫ブロットや免疫沈降の結果から少なくとも4種のエピトープ認識群に分類できた。細胞分画と免疫ブロットにより、正常cーRAF蛋白(74kd)はほとんど可溶性分画に分布するのに対し、融合型活性RAF蛋白は圧倒的に膜分画に局在することが判明した。また、最も特異的な抗体を用いて、主に核分画に局在する新しいRAF関連蛋白(56kd)を見出した。これらの抗体を用いることにより、cーRAF蛋白と相互作用をする蛋白の同定、cーRAF蛋白のキナーゼ活性の変化やリン酸化による活性調節を追求する道が開かれた。2.活性ras経路で発現の変化するcDNA:ホルモンによるras条件形質転換の系において、活性ras発現開始後の5時間で発現が上昇するcDNAクローン4種、減少するクローン1種を分離した。これらはいずれも比較的コピー数の多いmRNAに対応しているので、構造蛋白の遺伝子産物と思われる。3.cDNA発現ライブラリー:染色体DNAの移入による遺伝子の検索は、約70キロ塩基対までの遺伝子に限定されていた。そこで高能率のcDNAライブラリー構築と高発現を同時に満たす新しいlambdaファージベクターを開発した。これは13kbpまでのcDNAを強力な真核生物プロモーターの下流に挿入でき、しかもベクター単独では増殖できないという特長がある。更にベクター内にハイグロマイシン耐性マーカーを組込んであるため、DNA移入細胞を選抜することができる。この系による新しい遺伝子の検索を今後推進したい。4.その他:ハイグロマイシン耐性遺伝子との共移入によって、ヒト胃癌、肝癌、リンパ腫などからrasと異なる活性トランスフォーミング遺伝子を少なくとも3例検出した。それらのクローニングと実体の解明を開始する。

1. Anti-RAF antibody: A part of RAF protein (31kd) was developed and purified from Escherichia coli. Anti-RAF antibody was prepared. 14 kinds of antibodies were obtained, and the results of immune sedimentation were classified into 4 kinds. The distribution of normal RAF protein (74kd) in cellular immune system and soluble RAF protein in cellular immune system was investigated. A new RAF-associated protein (56kd) was identified in the main nuclear analysis system using the most specific antibody. The protein identity and activity regulation of c-RAF protein are investigated in this paper. 2. The cDNAs for the expression of ras in the active ras pathway were identified as 4 cDNAs and 1 cDNAs for the expression of ras in the active ras pathway. The number of genes in a protein is greater than the number of genes in a protein, and the number of genes in a protein is greater than that in a protein. 3. cDNA expression: chromosome DNA translation, gene expression, gene The high efficiency cDNA library is constructed and developed at the same time. This 13kbp cDNA is a powerful eukaryotic gene that can be inserted into the downstream of a cell. In addition, DNA transfer into cells can be achieved through cell culture. This new system will be implemented in the future. 4. Three cases were detected in the patients with gastric cancer, liver cancer and other diseases. The solution to the problem is to start the process.