心筋細胞の圧受容機序及び圧負荷によって活性化される細胞内情報伝達系の解析

心肌细胞压力感受机制及压力超负荷激活的细胞内信号转导系统分析

基本信息

批准号：
08258208
负责人：
山崎力
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08258208/
关键词：
アンジオテンシンII Raf-1キナーゼ ERK Src Csk Ras 心筋細胞

项目摘要

我々の研究室ではこれまでに、心筋細胞に伸展負荷を加えるとAngII、エンドセリン1(ET-1)といった液性因子がオートクリンファクターとして働き、ERKの活性化、前癌遺伝子の発現に続いて心肥大が形成されることを明らかにした。しかし、ERK上流の細胞内情報伝達系には不明な点が依然多いため、このリン酸化酵素カスケードを詳細に解析した。方法として、ラット新生仔培養心筋細胞に、Ras及びRaf-1キナーゼのdominant negative mutant(D.N.Ras、D.N.Raf-1)あるいはSrcファミリーキナーゼの機能を抑えるC-terminal Src kinase(Csk)の遺伝子を、ERK遺伝子と同時に導入した。また、種々のリン酸化酵素阻害薬で前処理し、AngII刺激後のRaf-1キナーゼ及びERK活性を測定した。その結果、AngIIによるERKの活性化は、Csk、D.N.Rasの影響は受けなかったが、D.N.Raf-1の導入で完全に抑制された。一方、フォルボルエステルの24時間刺激またはカルフォスチンCによりPKCを抑制すると、AngIIによるRaf-1キナーゼ及びERKの活性化が完全に抑制された。しかし、チロシンキナーゼ阻害薬(チルフォスチン、ゲニスタイン)及びRas阻害薬(マニュマイシン)は、AngIIによるERKの活性化を全く抑制しなかった。以上より、心筋細胞におけるAngIIによる肥大反応は、PKCに続くRaf-1キナーゼ/ERK経路の活性化を引き起こすことによって生じることが判明し、Srcファミリーキナーゼを含むチロシンキナーゼ、Rasは関与していないことが示された。

我们的实验室先前已经表明，当心肌细胞承受延伸的载荷时，诸如ANGII和内皮素1（ET-1）的体液因子充当自分泌因子，并且在激活ERK表达后会形成心脏肥大。但是，ERK上游的细胞内信号传导系统中仍然有许多未知数，因此详细分析了这种磷酸酶级联反应。作为一种方法，将C-末端SRC激酶（CSK）的基因抑制了RAS和RAF-1激酶显性阴性突变体（D.N.RAS，D.N.RAF-1）或SRC家族激酶的功能，同时被引入大鼠Neonatal培养的Cardiomyocyocycytes。另外，通过用各种磷酸烯酶抑制剂预处理ANGII刺激后的RAF-1激酶和ERK活性。结果，ANGII对ERK的激活不受CSK或D.N.RA的影响，而是被D.N.RAF-1的引入完全抑制。另一方面，通过刺激供应孔林或Carfostin C抑制PKC，完全抑制了Angii的Raf-1激酶和ERK的激活。然而，酪氨酸激酶抑制剂（Tilfostine，Genastein）和RAS抑制剂（Manumycin）根本不会抑制Angii的ERK激活。从上面可以发现，通过在PKC之后引起RAF-1激酶/ERK途径的激活发生，在心肌细胞中引起的肥大反应是不涉及RAS的RAF-1激酶/ERK途径，这表明RAS是一种含有酪氨酸激酶的RAS。