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シグナル伝達におけるPHドメインと蛋白質リン酸化酵素活性制御領域の相互作用の解析

信号转导中PH结构域与蛋白激酶活性控制区相互作用分析

基本信息

批准号：
08260214
负责人：
吉川潮
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PHドメインは細胞内シグナル伝達に関与する多種類の蛋白質中に存在し、これまでにPHドメインにはプロテインキナーゼC(PKC)、G蛋白質βγサブユニット、ホスファチジルイノシトール4,5-二リン酸、イノシトール三リン酸等の複数の物質が結合することが報告され、その結合の意義の解析が行なわれている。本研究では、その構造中にPHドメインを有するセリン/トレオニン蛋白質リン酸化酵素、RACプロテインキナーゼ(RAC-PK)を用いてPHドメインとPKCとの相互作用による蛋白質リン酸化酵素活性の制御機構の解析を実施した。RAC-PKとPKCとを培養細胞に共発現し、細胞刺激による両者の結合の変化を検討する過程で、熱ショックや高浸透圧といったストレスにより細胞内のRAC-PKの活性が上昇するという、従来、知られていなかったRAC-PKの活性化機構を見い出した。RAC-PKはホスファチジルイノシトール3-キナーゼの下流の標的として各種の細胞増殖因子により活性化されることが報告されているが、ストレスによるRAC-PKの活性化誘導はホスファチジルイノシトール3-キナーゼ阻害剤であるwortmanninによって抑制されないことから、ストレス応答としてのRAC-PKの活性上昇はホスファチジルイノシトール3-キナーゼを介しておらず、細胞増殖因子による活性化とは異なる伝達経路を介していると考えられる。また、RAC-PKの活性化の際にPKCファミリーの特定の分子種との結合が促進され、また、RAC-PKの活性化にはそのリン酸化反応が重要であることが報告されており、両者の間のリン酸化カスケードあるいは他の蛋白質リン酸化酵素をも含むクロストークの存在が想定される。今後、RAC-PKの活性化の分子機構およびPKCファミリーとの結合の生理的意義について検討を行うことを計画している。

PH protein is present in a variety of proteins related to intracellular protein expression, and the binding of a plurality of substances such as PH protein, C(PKC), G protein βγ, S protein, 4,5-dicarboxylic acid, and triacetic acid is reported and analyzed. In this study, we performed the analysis of the regulatory mechanism of protein acidifying enzyme activity in the interaction between PH and PKC in the structure of RAC-PK. RAC-PK is co-produced in cultured cells, and the mechanism of RAC-PK activation is revealed in the process of cell stimulation, high osmotic pressure, and high intracellular RAC-PK activity. RAC-PK activation induction of RAC-PK is reported in the report of RAC-PK activation induction of RAC-PK down-stream targets and various cell growth factors. RAC-PK activation induction is reported in the report of RAC-PK activation induction of RAC-PK down-stream targets and various cell growth factors. RAC-PK activity increases in response to cell growth factors, and increases in response to cell growth factors. In addition, the binding of specific molecular species of PKC protein is promoted during the activation of RAC-PK, and the specific acidification reaction is important during the activation of RAC-PK. This report concludes that the existence of other protein acidification enzymes including riboflavin is conceivable. In the future, the molecular mechanism of RAC-PK activation and the physiological significance of PKC binding will be discussed.