内向き整流性K^+チャネルと機能相関する膵B細胞蛋白のクローニング

与内向整流 K^+ 通道功能相关的胰腺 B 细胞蛋白的克隆

• 批准号: 08268205
• 负责人: 武田 純
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08268205/
• 关键词: 内向き整流性K^+チャネル; 機能関連分子

内向き整流性K^+チャネルのヒトROMK1のN端結合蛋白を同定するために、N端76残基をプローブとして、Two-hybrid systemを用いてKidney cDNA libraryをスクリーニングした。その結果、9個の陽性クローンを検出した。そのうち、7個のクローンからDNAを調製して塩基配列を決定した。2個は既知遺伝子に由来するものであり、deoxycytidine kinase(aa.147^-)とNADH dehydrogenase subunit 5(aa.18^-)であった。他の5個のクローンに含まれた配列は、データベースに登録されたどの配列とも一致しなかったので未知遺伝子に由来するものと考えられた。本研究によって7つの陽性クローンを同定したが、これらは当初の予想を大きく下回る数であった。そこで、用いたtwo-hybridライブラリーのスクリーニング効率を検定するために、ライブラリーから無作為に200個のクローンを選択して部分塩基配列(EST)を決定した。その結果、3'非翻訳領域のみの場合(10%)や読みフレームのずれに加えて(30%)、開始コドンを越えて5'非翻訳領域を含むもの(34%)、膜貫通部分まで含んでしまうもの、などcDNAが長すぎるために融合蛋白ができなかったり、核内へ移行できないことが原因であることが判明した。蛋白結合を検出するためには、100アミノ酸残基程度あればよいので、新たに膜蛋白も含めて全ての結合分子が検出されるように、cDNA平均長が500bp以下である特別のライブラリーによるスクリーニングを試みている。

Introverted き rectifier sex K ^ + チ ャ ネ ル の ヒ ト ROMK1 の n-terminal binding protein を with fixed す る た め に, n-terminal 76 residues を プ ロ ー ブ と し て, Two hybrid system を with い て Kidney cDNA library を ス ク リ ー ニ ン グ し た. Youdaoplaceholder0 <s:1> result, 9 <s:1> positive <s:1> ロ ロ ロ を検 を検 を検 を検 result of た た. Youdaoplaceholder0 うち うち, 7 <s:1> <s:1> ロ ロ <s:1> ら ら らDNAを modulates て て base arrangement を determines た. Two <s:1> known relics 伝 subunits に origin する であ であ <s:1> deoxycytidine kinase(aa.147^-)とNADH dehydrogenase subunit 5(aa.18^-)であった. He の five の ク ロ ー ン に containing ま れ た column は, デ ー タ ベ ー ス に login さ れ た ど の match column と も consistent し な か っ た の で unknown legacy 伝 son に origin す る も の と exam え ら れ た. This study に よ っ て 7 つ の positive ク ロ ー ン を with fixed し た が, こ れ ら は の original to think big を き く る number next time で あ っ た. そ こ で, use い た two - hybrid ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ sharper rate を 検 set す る た め に, ラ イ ブ ラ リ ー か ら inaction に 200 の ク ロ ー ン を sentaku し て part salt base with column (EST) を decided し た. そ の results, 3 'not turn 訳 field の み の occasions (10%) や 読 み フ レ ー ム の ず れ に plus え て (30%), start コ ド ン を more え て 5' non turn を 訳 field containing む も の part (34%), transmembrane ま で containing ん で し ま う も の, な ど cDNA が long す ぎ る た め に fusion protein が で き な か っ た り, nuclear へ transitional で き な The reason is である た. Protein binding を 検 out す る た め に は, 100 ア ミ ノ acid residues level あ れ ば よ い の で, new た に membrane protein contains も め て full て の combined with molecular が 検 out さ れ る よ う に, cDNA under an average of 500 bp long が で あ る special の ラ イ ブ ラ リ ー に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を try み て い る.

项目成果

K.Yamagata et al: "Mutaions in the hepatic nuclear factor-1α gene in maturity-onset diabetes of the young (MODY3)." Nature. 384. 455-458 (1996)

K. Yamagata 等人：“青少年发病型糖尿病中肝核因子 1α 基因的突变 (MODY3)。” Nature 384. 455-458 (1996)

R.Hromas et al.: "Exodus,a novel chemokine that inhibits proliferation of hematopoietic progenitors and HIV." Blood. (印刷中). (1997)

R. Hromas 等人：“Exodus，一种抑制造血祖细胞和 HIV 增殖的新型趋化因子。”（出版中）。

K.Yamagata et al.: "Searching for NIDDM susceptibility genes : studies of genes with triplet repeats expressed in skeletal muscle." Diabetologia. 39. 725-730 (1996)

K.Yamagata 等人：“寻找 NIDDM 易感基因：研究骨骼肌中表达的三联体重复基因。”

A.Hino et al: "Changes in endothelial nitric oxide synthase mRNA during vasospasm after subarachnoid hemorrhage in monkeys." Neurosurgery. 39. 562-568 (1996)

A.Hino 等人：“猴子蛛网膜下腔出血后血管痉挛期间内皮一氧化氮合酶 mRNA 的变化。”

A.Hino et al.: "Increased expression of endothelin B receptor mRNA following subatachnoid hemorrhage in monkeys." J.Cerebral.Blood Flow Metab.16. 688-697 (1996)

A.Hino 等人：“猴子蛛网膜下腔出血后内皮素 B 受体 mRNA 的表达增加。”