HIV潜伏感染細胞の抗ミリストイル化剤による感染性ウイルス産生能消失機構

HIV潜伏感染细胞中抗肉豆蔻酰化剂丧失感染性病毒产生能力的机制

• 批准号: 08269101
• 负责人: 庄司 省三
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08269101/
• 关键词: HIV-1; N-Myristoylation; Bystander effect

HIV-1固有の産物に直接作用する阻害剤等はウイルスの持つ易変異原性のため,耐性ウイルスの出現を容易にし,人類のエイズ制圧の夢を打ち砕いている。申請者等は細胞性因子に一次的に作用し,その結果,bystander効果的にHIV-1を不活性化する生化学的反応を考え,タンパク質のN-ミリストイル(N-Myr)化反応に着目した。HIV-1潜伏感染細胞(ACH-2,2×10^5 cells/ml)を,最終濃度が50μMになるようにN-Myr化阻害剤を投与し,24時間培養後,ホルボールエステルによりウイルス産生活性化した後,さらに24時間培養した。細胞は経時的に回収し,western blot分析,培養上清中のp24抗原定量,及び逆転写酵素活性測定を行い,抗HIV活性を測定した。対照として,N-Myr化阻害剤未処理HIV-1潜伏感染についても同様に実験を行った。N-Myr化を阻害した結果,ウイルス構成gagタンパク質前駆体Pr55の細胞内蓄積及び培養上清中の娘ウイルス感染性の消失が認められた。しかしながら,培養上清中のp24抗原量および逆転写酵素活性において,対照実験と有意な差は認められなかった。このことから,N-Myr化阻害剤は娘ウイルスの感染性を消失させることが明らかになった。また,N-Myr化阻害剤処理及び未処理HIV-1潜伏感染細胞から産生される娘ウイルス粒子の形態を,透過型電子顕微鏡により観察した結果,N-Myr化阻害剤処理HIV-1潜伏感染細胞から産生される娘ウイルス粒子の形態は,涙型を呈し,正常な娘ウイルス粒子の形態とは著しく異なっていた。さらに,免疫電顕法によりgag及びenvタンパク質の感染細胞内局在観察した結果,N-Myr化阻害によるgag-envの会合の阻害及びenvタンパク質の発現抑制が認められ,bystander効果剤が画期的な抗エイズ剤になりうることを明確にした。

HIV - 1 inherent の product に direct action す る resistance against tonic such as は ウ イ ル ス の hold つ easy - different former sex の た め, patience ウ イ ル ス の appear を easy に し, human の エ イ ズ system 圧 の dream を play ち 砕 い て い る. Applicants に は cell sex factors such as a role に し, そ の as a result, the bystander unseen fruit を に HIV - 1 is not activeness す る biochemistry of anti 応 を え, タ ン パ ク qualitative の N - ミ リ ス ト イ ル (N - Myr) against 応 に with mesh し た. Latent HIV - 1 infected cells (ACH - 2, 2 x 10 ^ 5 cells/ml) を, final concentration が 50 microns に な る よ う に N - Myr resistance against tonic を cast with し, 24 time after the training, ホ ル ボ ー ル エ ス テ ル に よ り ウ イ ル ス produce activeness し た after さ ら に 24 time cultivating し た. The に reflux of cells over time,western blot analysis, quantification of <s:1> p24 antigen in the culture supernatant, び reverse 転 enzyme activity determination を and に, anti-HIV activity determination を and た. In contrast to と て て,N-Myr inhibitor is used to treat latent HIV-1 infection in the form of に と った て て て に similar to を laboratory を. N - Myr is changed を resistance against し た results, ウ イ ル ス constitute a gag タ ン パ ク 駆 body before mass Pr55 の intracellular accumulation and び の niang in the culture supernatant ウ イ ル ス infectious の disappear が recognize め ら れ た. し か し な が ら, の p24 antigen amount in the culture supernatant お よ び inverse planning write enzyme activity に お い て, polices according to be 験 と intentionally な poor は recognize め ら れ な か っ た. こ の こ と か ら, N - Myr chemical resistance against tonic は niang ウ イ ル ス の infectious を disappear さ せ る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, N - Myr resistance against tonic 処 principle and び 処 manage latent HIV - 1 not infected cells か ら produce さ れ る niang ウ イ ル を の ス particles form, through type electronic 顕 micromirror に よ り 観 examine し た results, N - Myr chemical resistance against tonic 処 manage latent infections of HIV - 1 cell か ら produce さ れ る niang ウ イ ル は の ス particles form, type 涙 を し, normal な niang ウ イ The <s:1> form of the ス particle is と なって and く different なって た た た. さ ら に, immune 顕 method に よ り gag and び env タ ン パ ク qualitative の bureau within infected cells in 観 examine し た results, N - Myr chemical resistance against に よ る gag - env meet の の resistance to harm and び env タ ン パ ク qualitative の 発 inhibit が now recognize め ら れ, bystander unseen fruit tonic が painting period な resistance エ イ ズ tonic に な り う る こ と を clear に し た .

项目成果

古石和親: "HIV-1ウイルス感染性獲得におけるgagタンパク質のN-ミリストイル基の役割" The 44th Annual Meeting of The Japanese Society of Virology. 55- (1996)

Kazuchika Furuishi：“gag蛋白的N-肉豆蔻酰基在获得HIV-1病毒感染性中的作用”日本病毒学会第44届年会55-（1996）。

古石和親: "HIV-1N-ミリストイル(Myr)-gagタンパク質の細胞内輸送" 生化学. 68. 804- (1996)

Kazuchika Furuishi：“HIV-1N-肉豆蔻酰 (Myr)-gag 蛋白的细胞内转运”《生物化学》68. 804- (1996)。

Shozo Shoji: "A novel monoclonal antibody to N-myristoyl glycine moiety found a newN-myristoylated HIV-1 p28^<gag> protein in HIV-1-infected cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.222. 344-351 (1996)

Shozo Shoji：“一种针对 N-肉豆蔻酰甘氨酸部分的新型单克隆抗体在 HIV-1 感染细胞中发现了一种新的 N-肉豆蔻酰化 HIV-1 p28^<gag> 蛋白”Biochem.Biophys.Res.Commun.222。

三隅将吾: "MALDI-TOF MASSによる翻訳時・後修飾蛋白質(N-Myristoyl-protein)の修飾部位の化学構造の決定" 生化学. 68. 627- (1996)

Shogo Misumi：“通过 MALDI-TOF MASS 确定翻译和翻译后修饰蛋白（N-肉豆蔻酰蛋白）中修饰位点的化学结构”生物化学 68. 627- (1996)。