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小児悪性腫瘍における癌抑制遺伝子の探索と単離

小儿恶性肿瘤抑癌基因的寻找与分离

基本信息

批准号：
08283102
负责人：
林泰秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、神経芽腫では81例の腫瘍と正常細胞を用い、各染色体上の多型プローブを用いてloss of heterozygosity(LOH)の検討を行った。LOHは1pでは25%、、2qでは32%、9pでは40%、11qでは25%、14qでは32%、18qでは40%に認められた。9番の欠失部位の11個のマーカーによる検討では、9pではD9S162とIFNAの間に、9qではD9S152とD9S158の間が高頻度のLOHがみられ、この領域に癌抑制遺伝子が存在すると推定された。この領域に存在するp16遺伝子のSouthern法の検討では、homozygous deletion(HD)はみられなかった。PCR-SSCP法の検討では、80例中1例にcodon52でmissense mutationがみられた。さらにNBの細胞株を用いてNorthenとWestern法により発現を検討したところ、19株中12株で発現の消失がみられた。EcoRIとSmaIを用いて検討したところ、12株中5株にmethylationがみられることが判明した。18qでは大腸癌から癌抑制遺伝子として単離されたDCC遺伝子を原因遺伝子の候補として検討を行った。RT-PCR法による検討では、細胞株25株中12株(48%)、新鮮腫瘍32例中14例(44%)に発現の消失や減弱がみられた。25組のプライマーを作成し、PCR-SSCP法を用いて変異の検討を行い、codon176とcodon1105のmissense変異をみいだしたが、nonsense mutationはみられなかった。白血病での検討では、HDはT-ALLで56例中26例(46%)、B前駆型ALLで58例中22例(38%)にみられ、それぞれにnonsense mutationが3例と2例に同定され、p16遺伝子がALLの9p21欠損の原因遺伝子であることが明らかになった。また11q23に座位するMLL遺伝子を用いてt(5;11)、t(X;11)、t(11;16)、t(11;12)、t(11;15)、より3つの新しい遺伝子の単離に成功した。現在これらの遺伝子の性状の検討、キメラcDNAによる機能解析を行っている。

This year, 81 cases of neuroblastoma were examined for loss of heterozygosity(LOH). LOH A review of the 11 LOHs in the 9-point deficit area indicates that there is a high frequency of LOH between D9S162 and IFNA at 9p and between D9S152 and D9S158 at 9q, and it is presumed that cancer-suppressing genes exist in this field. This domain contains p16 deletion and is referred to as homozygous deletion(HD). PCR-SSCP method was used to detect codon52 missense mutation in 1 out of 80 cases. In addition, 12 out of 19 cell lines were found and disappeared by Northen Western method. 5 out of 12 plants were methylated by EcoRI. 18Q. Colorectal Cancer Suppressor Gene and DCC Gene and Candidate Gene 12 out of 25 (48%) cell lines and 14 out of 32 (44%) fresh tumors were detected by RT-PCR. 25 sets of mutations, PCR-SSCP method, codon176, codon1105, missense mutation 26 cases (46%) of 56 cases of HD T ALL and 22 cases (38%) of 58 cases of B ALL were diagnosed as leukemia. In addition, the MLL heritage of seat 11q23 is successfully used in the new heritage of t(5;11), t(X;11), t(11;16), t(11;12), t(11;15), and 3. Now, we are going to study the characters and functions of these genes.