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小児悪性腫瘍における癌抑制遺伝子の探索と単離

小儿恶性肿瘤抑癌基因的寻找与分离

基本信息

批准号：
08283102
负责人：
林泰秀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、神経芽腫では81例の腫瘍と正常細胞を用い、各染色体上の多型プローブを用いてloss of heterozygosity(LOH)の検討を行った。LOHは1pでは25%、、2qでは32%、9pでは40%、11qでは25%、14qでは32%、18qでは40%に認められた。9番の欠失部位の11個のマーカーによる検討では、9pではD9S162とIFNAの間に、9qではD9S152とD9S158の間が高頻度のLOHがみられ、この領域に癌抑制遺伝子が存在すると推定された。この領域に存在するp16遺伝子のSouthern法の検討では、homozygous deletion(HD)はみられなかった。PCR-SSCP法の検討では、80例中1例にcodon52でmissense mutationがみられた。さらにNBの細胞株を用いてNorthenとWestern法により発現を検討したところ、19株中12株で発現の消失がみられた。EcoRIとSmaIを用いて検討したところ、12株中5株にmethylationがみられることが判明した。18qでは大腸癌から癌抑制遺伝子として単離されたDCC遺伝子を原因遺伝子の候補として検討を行った。RT-PCR法による検討では、細胞株25株中12株(48%)、新鮮腫瘍32例中14例(44%)に発現の消失や減弱がみられた。25組のプライマーを作成し、PCR-SSCP法を用いて変異の検討を行い、codon176とcodon1105のmissense変異をみいだしたが、nonsense mutationはみられなかった。白血病での検討では、HDはT-ALLで56例中26例(46%)、B前駆型ALLで58例中22例(38%)にみられ、それぞれにnonsense mutationが3例と2例に同定され、p16遺伝子がALLの9p21欠損の原因遺伝子であることが明らかになった。また11q23に座位するMLL遺伝子を用いてt(5;11)、t(X;11)、t(11;16)、t(11;12)、t(11;15)、より3つの新しい遺伝子の単離に成功した。現在これらの遺伝子の性状の検討、キメラcDNAによる機能解析を行っている。

This year, 81 cases of swollen tumors were analyzed using normal cells and polymorphic loss of heterozygosity (LOH) on each chromosome. LOHは1pでは25%, 2qでは32%, 9pでは40%, 11qでは25%, 14qでは32%, 18qでは40%められた. The missing parts of 9 chapters are 11 pieces, 9p is D9S162, 9q is D9 S152, D9S158, high frequency, high frequency, cancer suppression in the field, and presumption of existence.この区にexistent するp16缝子のSouthern law の検question では, homozygous deletion (HD) はみられなかった. The PCR-SSCP method was used to detect the mutation, and 1 out of 80 cases was the missense mutation of codon 52. The NB cell lines were produced using the Northen and Western method, and 12 of the 19 strains were produced using the Northen and Western method. EcoRIとSmaI was found to be methylation-resistant by using methylation in 5 out of 12 strains. 18qではColorectal cancerからCancer suppression 伝子として単利されたDCC 伝子をCause 伝子の candidateとして検椒行った. The RT-PCR method showed that 12 out of 25 cell lines (48%) and 14 out of 32 cases of fresh tumors (44%) showed signs of disappearance or weakening. 25 groups of のプライマーを成し, PCR-SSCP method いて変different の検 Discussion を行い, codon176 とcodon1105 のmissense 変different をみいだしたが, nonsense mutationはみられなかった. Leukemia, T-ALL, 26 out of 56 cases (46%), B-type ALL, 22 out of 58 cases (38%), nonsense Mutationが3 cases and 2 casesに同定され, p16 伝子がALLの9p21 deficiency reason 伝子であることが明らかになった.また11q23にseatするMLL伝子を用いてt(5;11),t(X;11),t(11 ;16), t(11;12), t(11;15), より3つの新しい伝子の単里に成した. Now we are analyzing the characteristics of これらの子の検, and analyzing the functions of キメラcDNA による.