MLL遺伝子の融合遺伝子のRDA法とマイクロアレイを用いた標的遺伝子の単離と解析

利用 RDA 方法和 MLL 基因融合基因微阵列分离和分析靶基因

• 批准号: 12877123
• 负责人: 林 泰秀
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877123/
• 关键词: 急性白血病; 11q23転座; MLL遺伝子; gene chip; HOXA9遺伝子; HOXD13遺伝子; SEPTIN6遺伝子; CDCRE1遺伝子; 急性リンパ性白血病; CBP遺伝子; p300遺伝子; 乳児白血病; AF4遺伝子

予後不良な11q23転座型急性リンパ性白血病(ALL)の11q23領域から単離されたMLL遺伝子を用いて、これまでにAF-5α遺伝子、CBP, p300,ABI-1,AF17q25,AF5q31,AF10q22遺伝子を単離した。今年度はさらに乳児急性骨髄性白血病のt(X;11)(q22;q23)のXq22領域よりcDNA panhandle polymerare chain reaction法を用いて新規遺伝子のSEPTIN6をクローニングした。この遺伝子はこれまでのMLLの相手遺伝子CDCREL1,AF 17q25と相同性がみられ、SEPTIN familyと思われた。現在マウスのSeptin6遺伝子を単離して、ES細胞に導入し、ノックアウトマウスを作成しつつある。これらの遺伝子のfull sequence を明らかにし、その性状を検討する。また同じ転座を持つ白血病細胞よりRNAを抽出してcDNAライプラリーを作成し、それぞれのキメラcDNAを作成し、ベクターに挿入してマウスの32Dc13細胞へ強制発現させ、発現の前後の細胞からRNAを抽出してcDNAを作成し、発現する遺伝子の違いをGene Chipを用いて発現プロファイルの検討を行い、標的遺伝子を検索している。今年度はt(4;11)-とt(11;19)-ALLの新鮮白血病検体各8例からRNAを描出し、Affymetrix社のGene Chipで発現プロファイルを検討した。これらの新鮮白血病検体のほとんどがこれまでにALLに特異的と報告された遺伝子の発現がみられ、t(4;11)の1例のみは急性骨髄性白血病に特異的とされる遺伝子の発現もみられたが、mixed lineageの性状を有することが示唆された。またt(4;11)とt(11;19)で異なった発現プロファイリングを示す遺伝子もみられ、HOXA9,HOXA10,HOXD13,FLT3,CD19等の遺伝子につき現在その詳細を検討している。

To bad な after 11 q23 planning type a acute リ ン パ leukemia (ALL) の 11 q23 field か ら 単 from さ れ た MLL heritage 伝 son を with い て, こ れ ま で に AF - 5 alpha heritage 伝, CBP, p300, ABI - 1, AF17q25, AF5q31, AF10q22 heritage 伝 son を 単 from し た. Our は さ ら に milk where acute leukaemia of sex of bone marrow の t (X; 11) (q22 q23) の Xq22 field よ り cDNA panhandle polymerare chain reaction method を with い て new rules but 伝 son の SEPTIN6 を ク ロ ー ニ ン グ し た. The <s:1> cultural heritage 伝 son 伝 れまで れまで <s:1> MLL <s:1> photographic hand legacy 伝 son CDCREL1,AF 17q25と photographic hand がみられ, SEPTIN familyと si われた. Now マ ウ ス の Septin6 posthumous son 伝 を 単 from し て, ES cells に import し, ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を made し つ つ あ る. <s:1> れら cultural heritage 伝 sub-<s:1> full sequence を description ら に に <s:1>, そ <s:1> characteristics を検 する する する. ま た with じ planning a を hold つ leukemia cells よ を り RNA extraction し て cDNA ラ イ プ ラ リ ー を し, consummate そ れ ぞ れ の キ メ ラ cDNA を し, consummate ベ ク タ ー に scions into し て マ ウ ス の 32 dc13 cells へ forced 発 now さ せ, 発 の cells before and after is の か ら RNA を spare し て cDNA を し, consummate 発 now す る 伝 son の Breach い を Gene Chip を with い て 発 now プ ロ フ ァ イ ル の 検 line for を い, mark but 伝 を 検 cable し て い る. Our は t (4; 11) - と t (11; 19) - ALL の fresh leukemia 検 body ALL 8 cases か ら RNA を trace し, Affymetrix の Gene Chip で 発 now プ ロ フ ァ イ ル を beg し 検 た. こ れ ら の fresh leukemia 検 body の ほ と ん ど が こ れ ま で に ALL に specific と report さ れ た posthumous son 伝 の 発 now が み ら れ, t (4; 11) 1 の の み は acute leukaemia of sex of bone marrow に specific と さ れ る posthumous son 伝 の 発 now も み ら れ た が, mixed lineage の traits are す を る こ と が in stopping さ れ た. ま た t (4; 11) と t (11; 19) で different な っ た 発 now プ ロ フ ァ イ リ ン グ を shown す heritage 伝 son も み ら れ, HOXA9 HOXA10, HOXD13, FLT3, CD19 etc. の heritage 伝 son に つ き now そ の detailed を beg し 検 て い る.

项目成果

Kojima S. et al.: "An effective chemotherapeutic regimen for acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome in children Down's syndrome."Leukemia. 14. 786-791 (2000)

Kojima S. 等人：“一种治疗急性髓性白血病和儿童唐氏综合症骨髓增生异常综合征的有效化疗方案。”白血病。

Sugita K. et al.: "MLL-CBP fusion transcript in a therapy-related acute myeloid leukemia with the t(11;16)(q23;p13) which developed in an acute lymphoblastic leukemia patient with Fanconi anemia."Genes Chromosome Cancer. 27. 264-269 (2000)

Sugita K. 等人：“治疗相关急性髓性白血病中的 MLL-CBP 融合转录本，其在患有范可尼贫血的急性淋巴细胞白血病患者中形成，具有 t(11;16)(q23;p13)。”基因染色体癌症

Hayashi Y. et al.: "SN-1, a novel leukemic cell line with t(11;16)(q23;p13): myeloid characteristics and resistance to Retinoids and Vitamin D3."Cancer Res. 60. 1139-1145 (2000)

Hayashi Y. 等人：“SN-1，一种具有 t(11;16)(q23;p13) 的新型白血病细胞系：骨髓特征以及对类视黄醇和维生素 D3 的抗性。”Cancer Res。

Tatsumi K.: "The CDCRL1 gene fused to MLL in de novo acute myeloid leukemia with t(11;22)(q23;q11.2) and its frequent expression in myeloid leukemia cell lines"Genes Chromosomes Cancer. 30. 230-235 (2001)

Tatsumi K.：“CDCRL1 基因与 t(11;22)(q23;q11.2) 的新发急性髓性白血病中的 MLL 融合，及其在髓性白血病细胞系中的频繁表达”《基因染色体癌症》。

Niitsu N.: "Sensitization by 5-aza-2'-deoxyeytidine of leukaemia cells with MLLabnorma!ities to induction of differentiation by all-trans retinoic acid and 1alpha, 25-dihydroxyvitamin D3"Br J Haematol. 112. 315-326 (2001)

Niitsu N.：“MLLab正常的白血病细胞通过5-氮杂-2-脱氧胞苷对全反式视黄酸和1α，25-二羟基维生素D3诱导分化进行敏化”Br J Haematol。