ディファレンシアル・ディスプレイ法による転座関連キメラmRNAの役割の解析

使用差异显示法分析易位相关嵌合mRNA的作用

• 批准号: 09877143
• 负责人: 林 泰秀
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877143/
• 关键词: ディファレンシアルディスプレイ; サブトラクション; MLL遺伝子; EWS遺伝子; CBP遺伝子; P300遺伝子; ABI・1遺伝子; ディファランシアル・ディスプレイ; 白血病; ユ-イング肉腫; t(11;16); t(11;22); MLL-CBP; EWS-FLI1; 遺伝子導入

11q23転座のt(11;22)とt(10;11)のキメラmRNAよりcDNAを作成し、マウスIL3依存性骨髄性細胞株LG細胞に導入してトランスフェクタントを作ることを考え、11q23転座のMLL遺伝子を用いて、t(11;22)(q23;q13)がMLL-p300、またt(10;11)はMLL-ABI-1キメラcDNAから作成されていることを明らかにし(Blood 92:1125,1998)、この全長のキメラcDNAを作成することから始めた。患者白血病細胞よりRNAを抽出し、cDNAを合成し、reverse transcriptase(RT)-PCR法により切断点を含む約4kbと2.5kbのMLL-p300とMLL-ABI-1キメラcDNAをクローニングした。最近ヒトp300のcDNAが単離されたので、切断点を含む約7kbの3′側のCBPのcDNAを供与していただき、やはり供与していただいたエクソン7までを含む5′側MLLcDNAと、クローニングしたMLL-p300キメラcDNAおよび3′側CBPcDNAをつなぎ、約10kbの全長のMLL-p300キメラcDNAを作成した。現在このキメラcDNAをレトロウイルスベクターに組み込みリン酸カルシウム法を用いてマウスのLG細胞への導入を行っており、MLL-p300キメラ蛋白を発現した細胞が得られた場合、今後、細胞の増殖速度の変化および分化傾向の有無を導入前の細胞と比較し、その性状を検索する。また導入前と後の細胞からそれぞれRNAを抽出し、これらよりcDNAを作成してdifferential display用のプライマーセット20組を用いてPCRで増幅し、両者のバンドの増減を検索し、MLL-p300キメラ蛋白によって誘導される遺伝子の単離を試みている。さらにrepresentative differential assayにても同様の検討を行っている。

11q23 seat

项目成果

Taki T.et al.: "ABI-1、a human homolog to mouse abl-interactor 1、fuses the MLL gene in acute myeloid leukemia with t(10;11)."Blood. 92. 1125-1130 (1998)

Taki T. 等人：“ABI-1 是小鼠 abl-interactor 1 的人类同源物，将急性髓性白血病中的 MLL 基因与 t(10;11) 融合。”Blood. 92. 1125-1130 (1998)

Takita J.et al.: "The p16(CDKN2A) gene is involved in the growth of neuroblastoma cells and its expression is associated with prognosis of neuroblastoma patients." Oncogene.17. 3137-3143 (1998)

Takita J.等人：“p16(CDKN2A)基因参与神经母细胞瘤细胞的生长，其表达与神经母细胞瘤患者的预后相关。”

Gamou T.et al.: "The partner gene of AML1 in t(16;21) myeloid malignancies is a novel member of the MTG8 (ETO) family."Blood. 91. 4028-4037 (1998)

Gamou T.等人：“t(16;21) 骨髓恶性肿瘤中 AML1 的伴侣基因是 MTG8 (ETO) 家族的新成员。”血液。

Kitabayashi I.et al.: "The AML1-MTG8 leukemic fusion protein forms a complex with a novel member of the MTG8(ETO/CDR)family,MTGR1." Mol Cell Biol. 18. 846-858 (1998)

Kitabayashi I.et al.：“AML1-MTG8 白血病融合蛋白与 MTG8(ETO/CDR) 家族的新成员 MTGR1 形成复合物。”

Kong X-T, et al.: "Consistent detection of TLS/FUS-ERG chimeric transcripts in acute myeloid leukemia with t(16;21) (p11;q22) and identification of a novel transcript." Blood. 89. 1192-1199 (1997)

Kong X-T 等人：“使用 t(16;21) (p11;q22) 一致检测急性髓系白血病中的 TLS/FUS-ERG 嵌合转录本，并鉴定出新的转录本。”