アクチン細胞骨格を介するABCトランスポーターとイオンチャネルの機能共役

ABC 转运蛋白和离子通道通过肌动蛋白细胞骨架的功能耦合

• 批准号: 09257215
• 负责人: 古川 哲史
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257215/
• 关键词: カリウムチャネル; 細胞骨格; アクチン; 蛋白-蛋白相互作用; 酵母2ハイブリッド; パッチクランプ

ABCトランスポーターのなかのスルフォニルウレア受容体(SUR)のNBF1・NBF2周辺のアミノ酸配列と相互作用する蛋白を酵母2ハイブリッドスクリーニング法にて探索するという角度からABCトランスポーターの機能調節を検討し以下の結果を得た。1.膵臓型SURであるSUR1、心臓・神経型SUR2のNBF1・NBF2を含むバイトを作成し膵臓、心臓、脳のcDNAライブラリー各100万コロニーをスクリーニングしたところ、心臓・神経型SUR2のNBF1周辺配列と結合する蛋白をコードするcDNAが心臓・脳cDNAライブラリーからそれぞれ2種類単離された。一方は細胞膜Ca-ATPaseであり、他方は未知のcDNAであった。哺乳動物細胞2ハイブリッドアッセイを行った結果未知のcDNAは哺乳動物細胞でもSUR2のNBF1と相互作用することが、Ca-ATPaseは明確な結果が得られなかった。2.単離された未知cDNAのmRNAは検討したすべての組織に存在し、中でも心臓における分布が最も豊富であった。3.このcDNAの全塩基配列を決定すべく海馬cDNAライブラリーをスクリーニングしたところopen reading frameを含む未知のcDNAが単離されこれはalternative splicingによる4種類のアイソフォームが存在することが判明した。4.SUR1と未知蛋白との相互作用にはSUR1のNBF1およびその直後のGAG trinucleotide repeatによりコードされるpoly-glutamateを中心としたマイナスに荷電したアミノ酸配列が必要であった。5.この未知の蛋白がABCトランスポーターの他のメンバーはSUR1,CFTR,MDR1のNBF1およびNBF2とは相互作用せずこの共役はSUR2に特異的であった。

ABC receptor (SUR) NBF1・NBF2 acid ligand and interaction proteinをYeast 2ハイブリッドスクリーニング法にてExploreするというangleからABC トランスポーターの function adjustment and the following results are obtained. 1. Including SUR1 and NBF2 type SUR2 and NBF1 and NBF2 types 1 million コロニーをスク made of むバイトをmade し膵臓, 心臓, 脳のcDNAライブラリーリーニングしたところ、心懓・神経type SUR2のNBF1 综合与するproteinをコードするcDNAが心臓・脳cDNAライブラリーからそれぞれ2 kinds of single separationされた. One side uses the cell membrane Ca-ATPase, and the other side uses the unknown cDNA. Mammalian cells 2ハイブリッドアッセイを行ったUnknown resultのcDNAはMammalian cellsでもSU The interaction between R2 and NBF1 is clear, and the result of Ca-ATPase is clear and clear. 2. The existence and distribution of unknown cDNA and mRNA are the same as those in the tissue. 3. このcDNAの全桩组组组すべく海马cDNAライブラリーをスクリーニングしたところopen reading Frameをcontains のcDNA of unknown originされこれはalternative splicingによる4 kinds of のアイソフォームがexistenceすることがidentifyした. 4. SUR1 is an unknown protein and interacts with SUR1 and NBF1 is directly behind the GAG trinucleotide. repeatによりコードされるpoly-glutamateをcenterとしたマイナスにchargedしたアミノacid glutamateがnecessaryであった. 5. Unknown protein がABCトランスポーターのhis のメンバーはSUR1,CFTR,M DR1のNBF1およびNBF2とはinteractionせずこの同事はSUR2にSpecialityであった.

项目成果

古川哲史,中島忠: "病態とイオンチャネルのリモデリング(心肥大、心不全、QT延長症候群)" 心臓. (印刷中).

Satoshi Furukawa、Tadashi Nakajima：“病理学和离子通道重塑（心脏肥大、心力衰竭、长 QT 综合征）”心脏（正在出版）。

古川哲史: "心筋細胞イオンチャネルの不均一性-心内膜側・心外膜側の差異" 心臓.

Satoshi Furukawa：“心肌细胞离子通道的异质性 - 心内膜和心外膜侧之间的差异”心脏。

Hiraoka M, Furukawa T: "Functional modulation of cardiac ATP-sensitive potassium channel." News in Pharmacological Science. (in press).

Hiraoka M、Furukawa T：“心脏 ATP 敏感钾通道的功能调节。”

Furukawa T, Ogura T, Katayama Y, Hiraoka M: "Characteristics of rabbit ClC-2 expressed in Xenopus oocytes and its contribution to volume regulation" American Journal of Physiology. (in press).

Furukawa T、Ogura T、Katayama Y、Hiraoka M：“非洲爪蟾卵母细胞中表达的兔 ClC-2 的特征及其对体积调节的贡献”美国生理学杂志。

古川哲史,小倉武彦: "Clチャネルの分子生物学" 心臓. (印刷中).

Satoshi Furukawa、Takehiko Ogura：“Cl 通道的分子生物学”心脏（正在出版）。