伸展刺激により活性化される心筋クロールチャネルの分子構造と機能

牵张刺激激活心肌爬行通道的分子结构和功能

• 批准号: 06770483
• 负责人: 古川 哲史
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770483/
• 关键词: チャネル; クロライド; 不整脈; 心筋; 心肥大; 心不全

本年度はラットでクロライドチャネル遺伝子のfamilyを形成していることが知られているCLC遺伝子familyに相当するクロライドチャネル遺伝子を家兎心臓から得ることを目的にdegenrative oligonucleotideprimersを3組作成し、家兎心房・心室のmRNAを鋳型にRT-PCRを行った。その結果、心房にはラットのCLC-2と相同性の高いクローンが高頻度に存在しており、心室にはラットのCLC-3と相同性の高いクローンが高頻度に存在することが確認された。CLC-2はラット上皮細胞において伸展刺激により活性化されるクロライドチャネルをコードすることが知られているので、まず家兎心房のmRNAからcDNAライブラリーを作成し、得られたRT-PCR産物を用いてスクリーニングを行った。その結果得られたクローンは5′端が部分的に欠けていたのでprimer extension法と5′RACE法を用いて全長を得た。このクローンの遺伝子構造を解析した結果は3421塩基、921アミノ酸からなり、ラットCLC-2と塩基レベルで63%の相同性を有しており、アミノ酸レベルでは84%の相同性を有していた。また後者は心室のmRNAから作成したcDNAライブラリーをスクリーニングした部分的にその遺伝子構造の解析を行ったが、ラットCLC-3とアミノ酸レベルでほとんど100%に近い相同性を有していた。これらのクローンの心房・心室での分布をNorthern blot analysis、RT-PCR法を用いて検討したが、予想どうり前者は心房でその発現が強く、後者は心室でその発現が高いことが確認された。

This year's はラットでクロライドチャネル伝子のfamilyをformationしていることが知られているCLC 伝子The family is quite the family. The purpose is degenerative. oligonucleotide primers were prepared in 3 sets, and RT-PCR was performed based on the atrium and ventricular mRNA type.そのresult, atrium にはラットのCLC-2 とidentity の高いクローンが high frequency にexistent しており, Ventricular にはラットのCLC-3とidentityの高いクローンがHigh frequency にExistence することがConfirmationされた. CLC-2 stimulates the stretching of epithelial cells and activates themれるクロライドチャネルをコードすることが知られているので, まず家兎综合のmRNAからcDNAライブラリーを was made, and the られたRT-PCR product was obtained using いてスクリーニングを行った. The result of this is the primer extension method and the 5′ RACE method.このクローンの缝子structural analysis results したは3421塩base, 921アミノ acid からなり, ラットCLC -2 と塩婬ベルで63% identical のしており, アミノ acid レベルでは 84% identical を有していた.またlater はventricular のmRNAから したcDNAライブラリーをスクリーニングしたpart of にその缝子construct Made of analysis and analysis of the line, ラットCLC-3 とアミノ acid レベルでほとんど100% close and identical を有していた. Distribution of atria and ventricles Northern blot analysis, RT-PCR method is used for the purpose of analysis, and the former is used for the atrium, and the latter is confirmed for the ventricle.

项目成果

K.Fushimi,et al.: "Functional characterization and cell immunolocalization of AQP-CD water channel in kidney collecting duct" American Journal of Physiology. 267. F573-F582 (1994)

K.Fushimi 等人：“肾集合管中 AQP-CD 水通道的功能特征和细胞免疫定位”美国生理学杂志。

J.Nitta et al.: "Subcellular mechanism for Ca^<2+>-dependent enhancement of delayed rectifier K^+ current in isolatedmembrane patches of guinea-pig ventricular myocytes." Circulation Research. 74. 96-104 (1994)

J.Nitta等人：“豚鼠心室肌​​细胞分离膜片中延迟整流K^电流的Ca^2依赖性增强的亚细胞机制”。