卵減数分裂におけるA型サイクリンの機能

A型细胞周期蛋白在卵子减数分裂中的作用

基本信息

批准号：
09264217
负责人：
小林英紀
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09264217/
关键词：
細胞周期 M期サイクリンサイクリンA サイクリン依存性キナーゼ cdc28 出芽酵母

项目摘要

サイクリンはCdkと結合して細胞周期におけるCdkキナーゼ活性を調節する蛋白質である。細胞周期におけるM期サイクリンの機能と構造の関係を明らかにするため、XenopusサイクリンAを出芽酵母に導入して細胞周期停止を引き起こし、それを抑圧する酵母変異株(サプレッサー変異)を分離して、サイクリンAのM期特異的な機能に関るサイクリンドメインの解析と因子の同定について解析を行った。M期サイクリンの分解ボックスとcdk結合部位サイクリンボックス間の保存領域であるN末端ヘリクッスに注目してその機能を解析した結果、N末端ヘリクッスはCdc2と弱い相互作用を示すことがわかった。サイクリンによる酵母生育阻止を抑圧するサプレッサー変異株の中から同定したcdc28変異は、サイクリンのN末端ヘリックス構造と相互作用するCdc28のC末端葉に変異部位をもち、異なるサイクリンとの選択的相補能をしめした。サイクリン-Cdk複合体はサイクリンボックスとPSTAIRE領域との強い結合で複合体を形成しているが、サイクリンN末端ヘリックスとCdkのC末端葉との弱い結合が、サイクリン-Cdkの結合特異性を決めて細胞周期の継時進行において重要な役割を果たしている可能性が示された。今後、酵母の2-ハイブリッド法とサプレッサー変異株の分離を利用して、この領域と特異的に結合する機能制御因子をクローニングし、サイクリンのN末端分解ドメインと相互作用する調節因子の遺伝子クローニングとM期サイクリンの分解に関する機能解析を行なう計画である。

细胞周期蛋白是与CDK结合并调节细胞周期中CDK激酶活性的蛋白质。为了阐明在细胞周期中M期Cyclin的功能和结构之间的关系，将爪诺蛋白酶细胞周期蛋白A引入了萌芽的酵母中，以引起细胞周期停滞，酵母突变菌株（抑制突变）被抑制细胞周期停滞，分离出来，并分析与Cyclase特异性功能相关的Cyclase特定功能，并鉴定了Cyclase特异性功能。我们通过专注于N末端的螺旋素（M相细胞蛋白的降解盒和CDK结合位点的细胞周期盒之间的保守区域）来分析其功能，并发现N末端旋转室表现出与CDC2的相互作用较弱。在抑制剂突变体之间鉴定出抑制细胞周期蛋白抑制酵母生长的突变的Cdc28突变在Cdc28的C末端叶中具有一个突变位点，该突变与细胞周期蛋白的N末端螺旋结构相互作用，表明与不同细胞周期蛋白的选择性互补。尽管Cyclin-CDK复合物形成了Cyclin Box和PSTAIRE区域之间具有强结合的复合物，但已表明Cyclin n末端螺旋与CDK的C端叶之间的弱结合可以确定Cyclin-CDK的结合特异性，并在细胞周期进展中起重要作用。将来，我们计划使用酵母2杂交方法和抑制突变体的分离，以特异性结合该区域的克隆功能调节剂，并对与细胞周期蛋白的N末端降解结构域相互作用的调节剂的基因克隆进行功能分析，并对M-SPHASE CYCLADES DENGRADATION的N端降解结构域进行相互作用。