細胞周期チェックポイントにおけるM期サイクリン分解制御因子の機能解析

细胞周期检查点 M 期细胞周期蛋白降解调节因子的功能分析

基本信息

批准号：
12215115
负责人：
小林英紀
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞周期におけるサイクリン依存性キナーゼの活性はその調節サブユニトであるサイクリンの結合と分解により制御を受けている。M期サイクリンはユビキチンープロテアソーム経路により分解されるが、その分解制御については細胞周期チェッックポイントの観点から重要な研究課題となっている。本研究では、サイクリンと相互作用する新規の分解制御因子を分離同定し、その機能解析を行なった。我々はまず、サイクリンAのN末端ドメインを用いた2-ハイブリッド法にを用いて、アフリカツメガエルのXDRP1遺伝子をクローニングした。XDRP1は585アミノ酸からなる蛋白質であり、N末端領域にユビキチンと高い相同性を示し、出芽酵母のDsk2蛋白質とよく似ていた。XDRP1はサイクリンAのリン酸化部位を含むN末端ドメインと結合する。XDRP1はA型サイクリンさらに異種のサイクリンA(ヒト)とは結合するが、サイクリンBとは結合しないことから、A型サイクリンと特異的に結合する因子である。XDRP1はリン酸化蛋白質であり、サイクリンAキナーゼに依存してリン酸化される。XDRP1のリン酸化にはサイクリンA-CDKとの結合が必要である。XDRP1をインジェクトした受精卵の細胞分裂は阻害され、XDRP1蛋白質を加えた卵抽出液中では、サイクリンAの分解が選択的に阻害された。また、XDRP1の出芽酵母ホモログDSK2発現による生育阻止を抑圧するサプレッサーを分離してその変異を同定したところ、プロテアソームのサブユニットのPRE2,PRE9,RPN1,NAS2であることが明らかになった。これらの結果から、XDRP1/DSK2は蛋白分解経路とユビキチン経路とプロテアソム間をリンクして、サイクリンAの分解を負に制御する抑制因子ではないかと推測される。

细胞周期中细胞周期依赖性激酶的活性通过其调节亚基细胞周期蛋白的结合和降解来控制。 M期细胞周期蛋白被泛素 - 蛋白酶体途径降解，从细胞周期检查点的角度来看，其降解的调节已成为一个重要的研究主题。在这项研究中，我们分离并确定了与细胞周期蛋白相互作用并分析其功能分析的新型降解调节剂。我们首先使用2杂交方法使用Cyclin A的N末端结构域克隆了XXR XDRP1基因A。XDRP1是一种由585个氨基酸组成的蛋白质，在N-末端区域与泛素表现出高度同源性，并且与萌芽的DSK2蛋白质非常相似。 XDRP1与含有细胞周期蛋白的磷酸化位点的N末端结构域结合。XDRP1与A型细胞周期蛋白和异源细胞周期蛋白A（人）结合，而不是细胞周期蛋白B，而不是细胞周期蛋白B，并且是特异性结合与A Cyclins类型的因素。 XDRP1是一种磷酸化的蛋白质，以细胞周期蛋白A激酶依赖性方式磷酸化。 XDRP1的磷酸化需要与细胞周期蛋白A-CDK结合。抑制了注射XDRP1的受精卵的细胞分裂，在用XDRP1蛋白的卵提取物中选择性抑制了细胞周期蛋白A降解。此外，当分离由XDRP1的发芽酵母同系物表达引起的抑制抑制剂并鉴定出突变时，发现它们是蛋白酶体亚基的Pre2，pre2，pre9，rpn1和nas2。这些结果表明，XDRP1/DSK2是一种连接蛋白水解途径，泛素途径和蛋白酶的阻遏物，并对细胞周期蛋白A的降解进行负调节。