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ユビキチン関連蛋白質によるポリユビキチン鎖識別・運搬と仕分けの制御

通过泛素相关蛋白控制多聚泛素链识别、运输和分选

基本信息

批准号：
15032241
负责人：
小林英紀
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeのDsk2は、N末端領域のユビキチン様配列(UbLドメイン)を介してプロテアソームと結合し、C末端領域のUBAドメインを介してポリユビキチン鎖と結合することにより、ポリユビキチン化した基質をプロテアソームへ輸送する機能を持つ。細胞内のDsk2の機能に関与する因子を同定するため、DSK2の過剰発現による生育阻止に対し耐性を示す変異株の分離を行い、sem1変異株を分離した。SEM1は、sec15-1のマルチコピーサプレッサーとして同定された、89アミノ酸からなる蛋白質をコードしている遺伝子である。SEM1破壊株由来の細胞抽出液を用いてイムノブロットを行ったところ、ポリユビキチン鎖の蓄積が見られた。SEM1破壊株においてプロテアソームの基質蛋白質の分解が遅れていた。次にプロテアソームのサブユニットの変異であるrpn1-821とsem1Δの2重変異株、及びpre2-75とsem1Δの2重変異株を作製したところ、制限温度が低下した。これらのことから、Sem1が生体内においてプロテアソームの機能に関与することが示唆された。また、26Sプロテアソームの免疫沈降を行ったところ、Sem1蛋白質が26Sプロテアソームの19Sサブユニットと共沈することが分かった。また、SEM1破壊株において、26Sプロテアソームが不安定になることが明らかとなった。以前より報告されていた、19Sサブユニットの安定性に関与するサブユニットRPN10は、SEM1と遺伝学的相互作用を示し、rpn10Δsem1Δ二重破壊株は制限温度の低下を引き起こした。またこの二重破壊株由来の26Sプロテアソームはsem1Δ株よりもさらに不安定であることが明らかとなった。以上のことから、Sem1はプロテアソームの安定性に寄与するプロテアソームの19S RPの構成因子であることが示唆された。

Dsk2 of budding yeast Saccharomyces cerevisiae has the function of mediating the transfer and binding of UBL sites in the N-terminal domain and UBA sites in the C-terminal domain. DSK2 function related factors are identified, DSK2 expression is inhibited, and mutants are isolated. SEM1, sec15-1, 89, 8 SEM1: Cell extract from plant origin is used for cell culture and accumulation. SEM1: The breakdown of matrix proteins in the middle of a plant The temperature of the second generation is controlled by rpn1-821 and sem1Δ, and the temperature of the second generation is controlled by rpn 2-75 and sem1Δ. This is the first time that a person has ever had a problem with a computer. 26S protein and 19S protein were detected by immunoprecipitation. SEM1 is a new type of plant, 26S is a new type of plant, 26S is a new type of plant. Previous reports on the stability of 19S-19S-19S- The origin of this double broken plant is 26S. The stability of Sem1 is related to the component factors of Sem1 and Sem 2.