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神経活動依存的に発現する分子の探索と機能解析

以神经活动依赖方式表达的分子的搜索和功能分析

基本信息

批准号：
12053278
负责人：
山形要人
金额：
$ 34.24万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1)神経活動依存的に発現する接着分子arcadlin遺伝子のノックアウト(KO)マウスが既に作製済みである。このマウスを用いて、扁桃体連日刺激によるキンドリングの発達過程を解析したところ、ノックアウトマウスの方が脳波上も、また行動学的にもキンドリング形成が早いことが分かった。さらに、キンドリング終了後、Timm染色によって海馬顆粒細胞軸索(苔状線維)のterminal sproutingを解析したところ、ノックアウトマウスの方が発芽が亢進していることも確認された。以上の結果から、Arcadlin分子は異常可塑性の進行を抑制していると考えられた。2)ArcadlinはN-cadherinと相互作用することを明らかにしている。相互作用する領域を決定するため、N-cadherinの細胞外および細胞内領域欠失変異体をそれぞれ作成したが、いずれもArcadlinとの結合活性は残存していた。そこで、膜貫通領域の561番目のロイシンをプロリンに変え、ヘリックス構造を乱すと、Arcadlinとの結合が減弱することが分かった。このことは、N-cadherinとArcadlinは細胞膜内で結合する可能性を示唆している。3)Arcadlin細胞外領域の同種結合によって、TAO2→MKK3/6→p38MAPKのsequential phosphorylationとArcadlinのエンドサイトーシスが生じることを明らかにしている。そこで、この現象がニューロン内で起きるかどうかを確かめるため、海馬の培養ニューロンにarcadlin-EGFPを遺伝子導入し、Arcadlin細胞外領域蛋白質を加えたところ、Arcadlin-EGFPがスパイン頭部から樹状突起の方へ移動する像が観察された。4)動物個体のin vivo imagingのために、まず脳に深く刺入できるレンズを探索した。GRINレンズが、その目的に適していると考え、共焦点顕微鏡と組み合わせて使えるかどうか検討したが、色収差が予想以上に大きいため、難しいことが分かった。二光子レーザー顕微鏡との組み合わせは今後の課題である。

1) The に発 appearances and するs on which the activities of the god are dependent are arcadlin 缝子のノックアウト(KO)マウスがに做済みである.このマウスをUsing いて and tonsils for continuous stimulation によるキンドリングの発reaching process をanalysis したところ、ノックアウトマウスの方が脳波上も、また行学的にもキンドリング Formation がhayいことが分かった. After さらに, キンドリング, Timm staining, terminal of hippocampal granule cell axon (moss-like thread dimension) sproutingをanalyticsしたところ、ノックアウトマウスの方が発 sproutsが Hyperactivityしていることもconfirmationされた. The above results indicate that the abnormal plasticity of the Arcadlin molecule has been inhibited. 2)ArcadlinはN-cadherinとinteractionすることを明らかにしている. Interaction is determined by the domain, N-cadherin is determined by the extracellular domain and the intracellular domain is lost. The allogeneic をそれぞれ is made into したが, and the いずれもArcadlin is combined with active は remaining していた.そこで、Film penetration field No. 561 No. のロイシンをプロリンに変え、ヘリックスstructuralをriotすと、Arcadlinとのcombinationが weakenedすることが分かった. The possibility of binding N-cadherin and Arcadlin in the cell membrane is indicated. 3) Arcadlin's homogeneous binding in the extracellular domain, TAO2→MKK3/6→p38MAPK's sequence PhosphorylationとArcadlinのエンドサイトーシスが生じることを明らかにしている.そこで、このphenomenonがニューロン内でriseきるかどうかを正かめるため、海The horse's cultured arccadlin-EGFP was introduced into the body, A rcadlin extracellular domain protein をえたところ, Arcadlin-EGFP がスパインから dendritic protrusions の square へ movable する like が観 Observation された. 4) In vivo imaging of individual animals, deep penetration and exploration of individual animals. GRIN レンズが, そのpurpose に成していると考え, confocal micromirror group み合わせて用It's a great color, it's a big color, it's a big color difference, and it's a hard color. The two-photon micromirror system is a future project.