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骨系統疾患における軟骨骨化制御に関する研究-軟骨無形成症の病態解明・治療開発

骨系统疾病中软骨骨化的控制研究——软骨发育不全的病理学阐明和治疗进展

基本信息

批准号：
12137206
负责人：
田中弘之
金额：
$ 32万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

代表的な骨系統疾患である軟骨無形成症の病態を中心に、軟骨の骨化制御にかかわる諸因子を明らかにし、分子病態に基づく新たな治療法を開発することを目的に研究を行ってきた。前年度までの研究から構成的に活性化されたFGFR3はPTHrp遺伝子発現を抑制すること、PTH/PTHrPの導入によってin vitroでは細胞レベルで治癒せしめることが可能であることを示してきた。昨年度より軟骨無形成症のモデル動物である変異FGFR3のトランスジェニックマウスを用い骨器官培養、およびin vivoでのPTHの作用について検討した。胎仔骨を用いた骨器官培養ではPTHの添加により、増殖軟骨層の増加の結果骨伸長は著明に改善することを示した。さらに、in vivoにおいてもPTHの投与は骨の身長を促進すること、脊椎骨の変形によるか半身麻痺をPTHは防止することなどが明らかになり、軟骨無形成症の新たな治療薬としてPTHは有望であることが示された。一方、変異FGFR3が成長軟骨の分化増殖の異常をきたす分子メカニズムには不明な点が多いため、変異FGFR3の細胞内局在、リガンド依存性について各種変異体で検討を加えた。その結果細胞外ドメインに変異を有するTDI型FGFR3や膜貫通領域の変異であるACH型変異では細胞膜に局在すること、受容体の自己リン酸化はリガンド依存性を示すのに対し、細胞内TKドメインの変異であるTDII、HCH、SADDAN型変異ではFGFR3は細胞膜へ局在することはなく、受容体の自己リン酸化もリガンド依存性は示さなかった。この変異体が小胞体に局在するメカニズムを明らかにするため、KDEL受容体との結合を検討したところ、これら変異体では介在分子の結合を介してKDEL受容体と結合することが判明し、これが小胞体局在のメカニズムとなっている可能性が考えられた。さらに、FGFR3の細胞内情報伝達系の一つであるPLCγと変異FGFR3の結合を検討したところ、PLCγは従来報告のあるアミノ酸残基に結合すること、この結合したPLCγは次にPKCを活性化し、stat1のリン酸化を惹起し、stat1の核内移行、細胞増殖の低下、apoptosisの促進に働いていることが明らかとなった。つまり、変異の部位によって、細胞内情報伝達は著しく異なり、治療開発においてはその点を考慮する必要があると考えられた。FGFRの細胞内情報伝達経路複雑であり、受容体に結合しシグナルを振り分ける蛋白が存在するはずで、プロテオミクスの手法を用いた網羅的解析に着手し、興味ある蛋白の結合を同定している。

The research on the pathological center of cartilage formation, the control of cartilage ossification and the development of new therapeutic methods for molecular diseases Research conducted in the previous year has shown that activated FGFR3 can inhibit the expression of the PTHrp gene, and that the introduction of PTH/PTHrP in the vitro can cure cell diseases. The role of PTH in bone organ culture and in vivo was studied in animals with achondroplasia. Fetal bone is used in bone organ culture to improve bone elongation due to the addition of PTH and the growth of cartilage layer. In vivo, PTH is injected into the body to promote the growth of the spine. In vivo, PTH is injected into the body to prevent hemiplegia. In vivo, PTH is injected into the body to prevent hemiplegia. In vivo, PTH is injected into the body to prevent hemiplegia. A variety of FGFR3 genes are involved in the differentiation and proliferation of growing cartilage. As a result, there are differences in extracellular domain between TDI type FGFR3 and membrane penetration domain between ACH type FGFR3 and cell membrane domain, and differences in intracellular TK type FGFR3 and cell membrane domain between ACH type FGFR3. A study of the possibility of the binding of the KDEL receptor to the foreign molecule in the microcellular system; In addition, FGFR3 intracellular signaling system is reported to be associated with PLCγ and FGFR3, and PLCγ is reported to be associated with FGFR3 acid residues, and PLCγ is reported to be associated with PKC activation, stat1 inactivation, stat1 intracellular migration, cell proliferation reduction, apoptosis promotion. It is necessary to consider the different parts of the cell, the information transmission in the cell, and the treatment development. FGFR intracellular information transmission pathway complex, receptor binding, vibration analysis, protein existence, protein expression, protein expression.