NOにより形成されるDNA-タンパク質クロスリンクの遺伝的影響と修復

NO形成的DNA-蛋白质交联的遗传效应和修复

• 批准号: 14026033
• 负责人: 井出 博
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026033/
• 关键词: 一酸化窒素; 窒素酸化物; DNA損傷; クロスリンク; ヌクレオチド除去修復; DNA複製阻害; 発がん

細菌やウィルスの感染に伴う炎症は発癌リスク因子であることから,炎症と発癌の関係を過剰産生されたNOとの関連から検討する必要がある。NOとグアニンの反応で生じるオキザニンは,生体ポリアミンやDNA結合タンパクとクロスリンクを形成する。本研究では,細胞内におけるオキザニンのクロスリンク標的分子を探索するとともに,クロスリンク生成物のDNA複製に対する影響と修復機構を検討した。その結果,HeLa細胞内の主要クロスリンク標的分子として,41kDaおよび69kDaのタンパクの存在が確認された。前者の候補としては8-oxoguanine-DNA glycosylase (hOGG1)が考えられたが,hOGG1抗体を用いたクロスリンク阻害実験から,同タンパクはhOGG1ではないことが明らかとなった。DNA複製については,オキザニン-スペルミンクロスリンク生成物の影響を調べた。同クロスリンク損傷は強いDNA複製阻害効果を示したが,損傷乗り越え合成(translesion synthesis)も起こることが明らかとなった。オキザニン-スペルミンクロスリンク生成物では,塩基対形成に必要な水素結合部位が修飾を受けていることから,損傷乗り越え合成では,本来取り込まれるべきdCMP以外のヌクレオチドの取込が予想される。クロスリンク生成物の修復については,UvrABC酵素のオキザニン-スペルミンクロスリンク生成物に対する反応を検討した。UvrABCは損傷特異的なDNA切断活性を示したことから,クロスリンク生成物修復に対するヌクレオチド除去修復の関与が明らかとなった。真核生物においても同様な結果が予想されることから,ヒトのヌクレオチド除去修復再構成系を用いて同修復機構の関与を確認するとともに修復効率の定量的な解析を行う必要がある。

Bacterial infection is associated with inflammation and carcinogenesis factors, and the relationship between inflammation and carcinogenesis is necessary for discussion. NO: NO: This study aims to explore the molecular mechanisms involved in DNA replication and repair in cells. As a result, the presence of a major molecular marker in HeLa cells,41kDa and 69kDa, was confirmed. 8-oxoguanine-DNA glycosylase (hOGG1) is a candidate for the former, and hOGG1 antibody is used to block the former. DNA replication in the middle of the process, the number of possible products-select the product to adjust the impact. The same is true of DNA replication inhibition, which is caused by damage to DNA synthesis. In the product of Okeynin-Spilminkuroslinker, the hydroxyl group is modified at the water-binding site necessary for its formation. As a result, the damage to the nucleus becomes more and more complex, and the original function of Okeynin-Spilminkuroslinker other than CMP can be imagined. UvrABC enzyme is the first enzyme to be used in the repair of complex products. UvrABC has demonstrated damage-specific DNA cleavage activity in the repair of DNA products. In eukaryotes, the relationship between the repair mechanism and the quantitative analysis of the repair efficiency is necessary to determine the relationship between the repair mechanism and the repair efficiency.

项目成果

Terato, H.: "Novel repair activities of AlkA (3-methyladenine DNA glycosylase II) and endonuclease VIII for xanthine and oxanine, guanine lesions induced by nitric oxide and nitrous acid"Nucleic Acids Research. 30. 4975-4984 (2002)

Terato, H.：“AlkA（3-甲基腺嘌呤 DNA 糖基化酶 II）和核酸内切酶 VIII 对一氧化氮和亚硝酸诱导的黄嘌呤和恶嘌呤、鸟嘌呤损伤的新型修复活性”核酸研究。

Suzuki, T.: "Formation of a fairly stable diazointermediate of 5-methyl-2'-deoxycytidine by HNO_2 and NO, and its implication to a novel mutation mechanism in CpG site"Bioorganic Medicinal Chemistry. 10. 1063-1067 (2002)

Suzuki, T.：“HNO_2 和 NO 形成相当稳定的 5-甲基-2-脱氧胞苷重氮中间体，及其对 CpG 位点新突变机制的影响”《生物有机药物化学》。

Takao, N.: "Novel nuclear and mitochondrial glycosylases revealed by disruption of the mouse Nthl gene encoding an endonuclease III homolog for repair of thymine glycols"EMBO Journal. 21. 3486-3493 (2002)

Takao, N.：“通过破坏编码内切核酸酶 III 同源物的小鼠 Nthl 基因揭示了用于修复胸腺嘧啶二醇的新型核糖基酶和线粒体糖基化酶”EMBO 杂志。

Nakano, T.: "Detection of NO-induced DNA lesions by the modified aldehyde reactive probe (ARP) assay"Nucleic Acids Research. S2. 239-240 (2002)

Nakano, T.：“通过改良醛反应探针 (ARP) 测定检测 NO 诱导的 DNA 损伤”核酸研究。

Asagoshi, K.: "Effects of a guanine-derived formamidopyrimidine lesion on DNA replication. Translesion DNA synthesis, nucleotide insertion and extension kinetics"Journal of Biological Chemistry. 277. 14589-14597 (2002)

Asagoshi, K.：“鸟嘌呤衍生的甲酰胺嘧啶损伤对 DNA 复制的影响。跨损伤 DNA 合成、核苷酸插入和延伸动力学”生物化学杂志。