酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

来自高等真核生物的修复酶可识别氧化 DNA 损伤

基本信息

批准号：
10151233
负责人：
井出博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,酸化的損傷に対する塩基除去修復酵素hOGG1ならびにmNthl1の生化学的な酵素特性解析を行い,原核生物のホモログとの機能的な相違を検討した.1. 8-oxoGおよびme-Fapyを含むオリゴヌクレオチドを基質として,hOGG1およびFpgの両基質に対する活性と酵素パラメーターを調べた.8-oxoG,me-Fapyはともに両酵素の基質となることが示されたが,切断生成物は,hOGG1ではβ-脱離生成物であるのに対し,Fpgではβ,δ-脱離生成物であった.hOGG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmは数倍程度異なったが,反応効率(kcat/Km)は同程度であった.Fpgでも同様な検討を行ったところ,hOGG1に比べ高いkcatが得られたが,基質特異性に関してはhOGG1と同様な結果が得られた.NaBH_4存在下,8-oxoGあるいはme-Fapyを含む基質とhOGG1,Fpgをインキュベートし,生成物をSDS-PAGEで分析した.その結果,両酵素で基質-酵素間のクロスリンク複合体の存在が確認された.これは,反応中間体として,酵素-基質間でSchiff baseが形成されることを示している.2. 様々な損傷を含むオリゴヌクレオチド基質を用いてmNthl1と大腸菌ホモローグ(EndoIII)の基質認識の差を検討した.TGの立体異性体(5S,6R体と5R,6S体)に対する活性は,両酵素の間で有為な差は認められなかった.また,EndoIIIではTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTに対する活性は著しく低く,TGの約1/15であった.mNthl1でもTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTでは低かった.しかし,DHTに対する活性はEndoIIIの場合ほどの大きな差はなく,TGの1/2程度であった.

在这项研究中，我们分析了碱性切除修复酶Hogg1和Mnthl1的生化酶特性，以实现氧化损伤，并检查了原核同源物的功能差异1。我们使用含有8-oxog和Me-Fape的寡核苷酸研究了HOGG1和FPG底物的活性和酶参数。 8-oxog和Me-fapy均显示为这两种酶的底物，但是裂解产物是HOGG1中的β-脱落产物，而裂解产物是FPG中的β-脱离产物。 8-oxog和Me-papy的KCAT和KM差异几次，但反应效率为（KCAT/）km）相似。对FPG进行了类似的研究，与HOGG1相比，获得了KCAT，但就底物特异性而言，HOGG1获得了相同的结果。在NABH_4存在下，将HOGG1和FPG与含有8-oxog或Me-Fape的底物孵育，并通过SDS-PAGE分析产物。结果，两种酶证实了底物和酶之间的交联复合物。这是一个反应中间体，酶和底物之间的席夫。它表明形成了基础。2。我们使用含有各种损伤的寡核苷酸底物研究了MNTHL1和大肠杆菌同源物（entoIII）之间底物识别的差异。两种酶之间TG对立体异构体（5s，6r和5r和6s）的活性没有显着差异。此外，尽管对TG和UR的活性在内核中相似，但在DHT中，TG的活性明显降低。 MNTHL1对TG和UR也具有相似的活性，但DHT的活性很低。但是，针对DHT的活性不如内托伊II和TG大约1/2。