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酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

来自高等真核生物的修复酶可识别氧化 DNA 损伤

基本信息

批准号：
10151233
负责人：
井出博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,酸化的損傷に対する塩基除去修復酵素hOGG1ならびにmNthl1の生化学的な酵素特性解析を行い,原核生物のホモログとの機能的な相違を検討した.1. 8-oxoGおよびme-Fapyを含むオリゴヌクレオチドを基質として,hOGG1およびFpgの両基質に対する活性と酵素パラメーターを調べた.8-oxoG,me-Fapyはともに両酵素の基質となることが示されたが,切断生成物は,hOGG1ではβ-脱離生成物であるのに対し,Fpgではβ,δ-脱離生成物であった.hOGG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmは数倍程度異なったが,反応効率(kcat/Km)は同程度であった.Fpgでも同様な検討を行ったところ,hOGG1に比べ高いkcatが得られたが,基質特異性に関してはhOGG1と同様な結果が得られた.NaBH_4存在下,8-oxoGあるいはme-Fapyを含む基質とhOGG1,Fpgをインキュベートし,生成物をSDS-PAGEで分析した.その結果,両酵素で基質-酵素間のクロスリンク複合体の存在が確認された.これは,反応中間体として,酵素-基質間でSchiff baseが形成されることを示している.2. 様々な損傷を含むオリゴヌクレオチド基質を用いてmNthl1と大腸菌ホモローグ(EndoIII)の基質認識の差を検討した.TGの立体異性体(5S,6R体と5R,6S体)に対する活性は,両酵素の間で有為な差は認められなかった.また,EndoIIIではTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTに対する活性は著しく低く,TGの約1/15であった.mNthl1でもTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTでは低かった.しかし,DHTに対する活性はEndoIIIの場合ほどの大きな差はなく,TGの1/2程度であった.

In this study, the enzyme hOGG1, which removes and repairs the damage caused by acidification, is removed and repaired. Analysis of enzyme characteristics in biochemistry and analysis of enzyme properties in prokaryotes. Contrast analysis of enzyme functions in prokaryotes.1. 8-oxoGおよびme-Fapyをcontaining むオリゴヌクレオチドを matrix として, hOGG1 およびFpgの両 matrix に対するActive enzyme パラメーターをadjusted べた.8-oxoG, me-Fapy はともに両Enzyme の matrix となることが Show されたhO GG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmはseveral times differentなったが,reaction efficiency (kcat/ Km) は Same degree であった.Fpg でも同様な検question を行ったところ, hOGG1 に比べ高いkcatが got られたが, base Quality specificity is the same as the result of OGG1 and the same result. In the presence of NaBH_4, 8-oxoGあるいはme-Fap yをContaining matrixとhOGG1,Fpgをインキュベートし,Product SDS-PAGE analysisした.そのResults,両Enzyme Confirmation of the existence of the substrate-enzyme complex, Reaction intermediate, Schiff between enzyme-substrate baseが成されることをshowしている.2. 様々な Damage をContaining むオリゴヌクレオチド matrix を Use いてmNthl1と coliform ホモローグ (EndoIII) のdifferent matrix recognition を検検曗た.TGの三级The opposite sex (5S, 6R body, 5R, 6S body) is active, the enzyme is different, the enzyme is different, the enzyme is active, and the enzyme is active.するACTIVITY TO THE SAME DEGREE であったが, DHT に対するACTIVITY はしく LOW く, TG の ABOUT 1/15 であった.mNthl1 TGとUR に対するACTIVITY MATCH Degree is low, DHT is low, DHT is low, DHT is active The occasion of ndoIII is the same as the big difference, and the 1/2 degree of TG is the same.