酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

来自高等真核生物的修复酶可识别氧化 DNA 损伤

• 批准号: 10151233
• 负责人: 井出 博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151233/
• 关键词: DNA損傷; DNA修復酵素; エンドヌクレアーゼ; チミングリコール; ホルムアミドビリミジン; hOGG1; mNthl1

本研究では,酸化的損傷に対する塩基除去修復酵素hOGG1ならびにmNthl1の生化学的な酵素特性解析を行い,原核生物のホモログとの機能的な相違を検討した.1. 8-oxoGおよびme-Fapyを含むオリゴヌクレオチドを基質として,hOGG1およびFpgの両基質に対する活性と酵素パラメーターを調べた.8-oxoG,me-Fapyはともに両酵素の基質となることが示されたが,切断生成物は,hOGG1ではβ-脱離生成物であるのに対し,Fpgではβ,δ-脱離生成物であった.hOGG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmは数倍程度異なったが,反応効率(kcat/Km)は同程度であった.Fpgでも同様な検討を行ったところ,hOGG1に比べ高いkcatが得られたが,基質特異性に関してはhOGG1と同様な結果が得られた.NaBH_4存在下,8-oxoGあるいはme-Fapyを含む基質とhOGG1,Fpgをインキュベートし,生成物をSDS-PAGEで分析した.その結果,両酵素で基質-酵素間のクロスリンク複合体の存在が確認された.これは,反応中間体として,酵素-基質間でSchiff baseが形成されることを示している.2. 様々な損傷を含むオリゴヌクレオチド基質を用いてmNthl1と大腸菌ホモローグ(EndoIII)の基質認識の差を検討した.TGの立体異性体(5S,6R体と5R,6S体)に対する活性は,両酵素の間で有為な差は認められなかった.また,EndoIIIではTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTに対する活性は著しく低く,TGの約1/15であった.mNthl1でもTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTでは低かった.しかし,DHTに対する活性はEndoIIIの場合ほどの大きな差はなく,TGの1/2程度であった.

In this study, we analyzed the biochemical enzyme properties of the enzyme hOGG1 and mNthl1 in response to acidified damage, and investigated the functional differences between them in prokaryotic organisms. 1. 8-oxoG, me-Fapy contains a matrix that modulates enzyme activity and enzyme activity in response to Fpg's matrix. 8-oxoG,me-Fapy contains a matrix that modulates enzyme activity in response to Fpg's matrix. 8-oxoG, me-In the presence of NaBH_4, 8-oxoG, me-Fapy and HOGG1,Fpg were analyzed by SDS-PAGE. As a result, the presence of matrix-enzyme complex was confirmed. 2. The formation of Schiff base between enzyme and substrate. The substrate recognition of TG stereoisomers (5S, 6R and 5R,6S) is discussed. The enzyme activity is different from that of TG stereoisomers (5S, 6R and 5R). Endo III: TG and UR: Activity is low, TG is about 1/15, DHT is about 1/15, TG and UR: Activity is low. The activity of DHT is higher than that of EndoIII.

项目成果

Terato H.: "Novel modification of 5-formyluracil by cysteine derivatives in aqueous solution." Nucleosides Nucleotides. 17. 131-141 (1998)

Terato H.：“水溶液中半胱氨酸衍生物对 5-甲酰尿嘧啶的新型修饰。”

Asaeda A.: "Highly sensitive assay of abasic sites in mammalian cells.Optimization of aldehyde reactive prove (ARP) method." Analytica Chimica Acta. 365. 35-41 (1998)

Asaeda A.：“哺乳动物细胞脱碱基位点的高灵敏度测定。醛反应证明 (ARP) 方法的优化。”