酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

来自高等真核生物的修复酶可识别氧化 DNA 损伤

• 批准号: 10151233
• 负责人: 井出 博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151233/
• 关键词: DNA損傷; DNA修復酵素; エンドヌクレアーゼ; チミングリコール; ホルムアミドビリミジン; hOGG1; mNthl1

本研究では,酸化的損傷に対する塩基除去修復酵素hOGG1ならびにmNthl1の生化学的な酵素特性解析を行い,原核生物のホモログとの機能的な相違を検討した.1. 8-oxoGおよびme-Fapyを含むオリゴヌクレオチドを基質として,hOGG1およびFpgの両基質に対する活性と酵素パラメーターを調べた.8-oxoG,me-Fapyはともに両酵素の基質となることが示されたが,切断生成物は,hOGG1ではβ-脱離生成物であるのに対し,Fpgではβ,δ-脱離生成物であった.hOGG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmは数倍程度異なったが,反応効率(kcat/Km)は同程度であった.Fpgでも同様な検討を行ったところ,hOGG1に比べ高いkcatが得られたが,基質特異性に関してはhOGG1と同様な結果が得られた.NaBH_4存在下,8-oxoGあるいはme-Fapyを含む基質とhOGG1,Fpgをインキュベートし,生成物をSDS-PAGEで分析した.その結果,両酵素で基質-酵素間のクロスリンク複合体の存在が確認された.これは,反応中間体として,酵素-基質間でSchiff baseが形成されることを示している.2. 様々な損傷を含むオリゴヌクレオチド基質を用いてmNthl1と大腸菌ホモローグ(EndoIII)の基質認識の差を検討した.TGの立体異性体(5S,6R体と5R,6S体)に対する活性は,両酵素の間で有為な差は認められなかった.また,EndoIIIではTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTに対する活性は著しく低く,TGの約1/15であった.mNthl1でもTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTでは低かった.しかし,DHTに対する活性はEndoIIIの場合ほどの大きな差はなく,TGの1/2程度であった.

This study で は, acidification of the damage に す seaborne る salt base to remove repair enzyme hOGG1 な ら び に mNthl1 の な enzyme properties of biochemistry analytic を い, prokaryotes の ホ モ ロ グ と の functionary な conceives を beg し 検 た. 1. 8 - oxoG お よ び me - Fapy を containing む オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を matrix と し て, hOGG1 お よ び Fpg の struck matrix に す seaborne る と enzyme active パ ラ メ ー タ ー を adjustable べ た. 8 - oxoG, me - Fapy は と も に の struck enzyme substrate と な る こ と が shown さ れ た が, cut off products は, hOGG1 で は Beta from products で あ る の に し seaborne, Fpg で は beta, and delta - from product で あ っ た. HOGG1 の 8 - oxoG お よ び me - Fapy に す seaborne る kcat, several times Km は degree different な っ た が, anti 応 sharper rate (kcat/Km) は with degree で あ っ た. Fpg で も with others な 検 line for を っ た と こ ろ, hO GG1 に higher than べ い kcat が have ら れ た が, substrate specificity に masato し て は hOGG1 と with others in the result of な が ら れ た. NaBH_4 presence, 8 - oxoG あ る い は me - Fapy を containing む matrix と hOGG1, Fpg を イ ン キ ュ ベ ー ト し, products を sds-page analysis で し た. そ の results , struck between enzyme で matrix - enzyme の ク ロ ス リ ン ク complex の exist が confirm さ れ た. こ れ は, anti 応 intermediates と し て, between enzyme and substrate で Schiff base が form さ れ る こ と を shown し て い る. 2. Others 々 な damage を containing む オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ を ド matrix with い て mNthl1 と coliform ホ モ ロ ー グ (EndoIII) know の の matrix differential を beg し 検 た. TG の three-dimensional straight body (5 s, 6 r body と 5 r, 6 s) に す seaborne る active は, struck between enzyme の で for poor な は recognize め ら れ な か っ た. ま た, EndoII I で は TG と UR に す seaborne は る activity with degree で あ っ た が, DHT に す seaborne る active は the し く low く, TG の about 1/15 で あ っ た. MNthl1 で も TG と UR に す seaborne は る activity with degree で あ っ た が, DHT で は low か っ た. し か し, DHT に す seaborne る active は EndoIII の occasions ほ ど の is big Youdaoplaceholder0 な difference なく なく,TG 1/2 degree であった.

项目成果

Terato H.: "Novel modification of 5-formyluracil by cysteine derivatives in aqueous solution." Nucleosides Nucleotides. 17. 131-141 (1998)

Terato H.：“水溶液中半胱氨酸衍生物对 5-甲酰尿嘧啶的新型修饰。”

Asaeda A.: "Highly sensitive assay of abasic sites in mammalian cells.Optimization of aldehyde reactive prove (ARP) method." Analytica Chimica Acta. 365. 35-41 (1998)

Asaeda A.：“哺乳动物细胞脱碱基位点的高灵敏度测定。醛反应证明 (ARP) 方法的优化。”