NOにより形成されるDNA-タンパク質クロスリンクの遺伝的影響と修復

NO 形成的 DNA-蛋白质交联的遗传效应和修复

• 批准号: 12213091
• 负责人: 井出 博
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213091/
• 关键词: 一酸化窒素; 窒素酸化物; DNA損傷; クロスリンク; DNA修復; 突然変異

NOおよびこれに由来する窒素酸化物の遺伝子レベルでの毒性や発がんへの関与については未知の部分が多い.生物学的に意味のある低濃度のNOの暴露では,オキザニンとシトシンジアゾエートが主にDNA損傷として生成することを明らかにされている.両損傷の構造と反応性を考慮すると,DNAの近傍に存在する低分子アミン類やDNA結合タンパク質と損傷がクロスリンクし,二次的に形成されたDNA損傷が細胞致死や突然変異を誘発する可能性が高い.本研究では,NOおよび窒素酸化物により生成するDNA損傷とアミン類・DNA結合タンパク質の間でクロスリンクが形成されるか検討した.アミノ酸との反応ではデオキシオキザノシンの7位,デオキシシチジンジアゾエートの4位にアミノ酸のαアミノ基が付加した生成物が生じた.リジンでは側鎖のεアミノ基が付加した生成物も確認された.オキザニン・シトシンジアゾエートを部位特異的に導入したオリゴヌクレオチドを用いて,同様な反応が進行するか検討した.生成物をHPLCならびに電気泳動により分析した結果,DNA中のオキザニン・シトシンジアゾエートもアミノ酸,スペルミン,スペルミジンとクロスリンク形成することが明らかとなった.オキザニン・シトシンジアゾエートを含むDNAを用い,これらの損傷に対する種々の塩基除去修復酵素の修復活性を調べたが,明確な活性を示す酵素はなかった.したがって,DNAに生じたオキザニンやシトシンジアゾエートは修復されることなく細胞内分子(アミン類,DNA結合タンパク質)とクロスリンクを形成すると考えられ,今後,バルキーなDNA損傷を認識するヌクレオチド除去修復機構によるクロスリンク生成物の修復を検討する必要があると考えられる.

NO お よ び こ れ に origin す る acidification smothering element content の posthumous son 伝 レ ベ ル で の toxicity や 発 が ん へ の masato and に つ い て は が い more unknown の parts. Biology に mean の あ る low concentration の NO の exposed で は, オ キ ザ ニ ン と シ ト シ ン ジ ア ゾ エ ー ト が main に DNA damage と し て generated す る こ と を Ming ら か に さ れ て い る. Struck injury (の tectonic と anti 応 を consider す る と, DNA の nearly alongside に す る low molecular ア ミ ン class や dna-binding タ ン パ ク qualitative と damage が ク ロ ス リ ン ク し, secondary に form さ れ た DNA damage が cell death や suddenly - different を 発 lure す が high い る possibilities. This study で は, NO お よ び acidification smothering element content に よ り generated す る DNA damage と ア ミ ン class, DNA binding タ ン パ ク between qualitative の で ク ロ ス リ ン ク が form さ れ る か beg し 検 た. ア ミ ノ acid と の anti 応 で は デ オ キ シ オ キ ザ ノ シ ン の seven, デ オ キ シ シ チ ジ ン ジ ア ゾ エ ー ト の four に ア ミ ノ acid の alpha ア ミ ノ base pay plus が Born し た products が じ た. リ ジ ン で は side chain の epsilon ア ミ ノ base pay plus し が た products も confirm さ れ た. オ キ ザ ニ ン · シ ト シ ン ジ ア ゾ エ ー ト を site specific に import し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を with い て, with others in な anti 応 が for す る か beg し 検 た. Products を HPLC な ら び に electric 気 swimming に よ り analysis し た as a result, the DNA の オ キ ザ ニ ン · シ ト シ ン ジ ア ゾ エ ー ト も ア ミ ノ acid, ス ペ ル ミ ン, ス ペ ル ミ ジ ン と ク ロ ス リ ン ク form す る こ と が Ming ら か と な っ た. オ キ ザ ニ ン · シ ト シ ン ジ ア ゾ エ ー ト を containing む DNA を い, こ れ ら に の damage す seaborne る kind 々 の salt base to remove の repair repair enzyme activity を adjustment べ た が, clear な active を す enzyme in は な か っ た. し た が っ て, DNA に raw じ た オ キ ザ ニ ン や シ ト シ ン ジ ア ゾ エ ー ト は repair さ れ る こ と な く intracellular molecules (ア ミ ン class, DNA binding タ ン パ ク qualitative) と ク ロ ス リ ン ク を form す る と exam え ら れ, DNA damage in the future, バ ル キ ー な を know す る ヌ ク レ オ チ ド remove repair agency に よ る ク ロ ス リ ン ク products の repair を beg す 検 る necessary が あ る と exam え ら れ る.

项目成果

Asagoshi,K.: "Recognition of formamidopyrimidine by Escherichia coli and mammalian thymine glycol glycosylases.Distinctive paired base effects and biological and mechanistic implications."Journal of Biological Chemistry. 275. 24781-24786 (2000)

Asagoshi,K.：“大肠杆菌和哺乳动物胸腺嘧啶乙二醇糖基化酶对甲酰胺嘧啶的识别。独特的配对碱基效应以及生物学和机械学意义。”生物化学杂志。

Masaoka,A.: "Preparation and enzymatic recognition of guanine lesions induced by nitrogen oxides."Nucleic Acids Symposium Series. 44. 87-88 (2000)

Masaoka,A.：“氮氧化物诱导的鸟嘌呤损伤的制备和酶促识别。”核酸研讨会系列。

Suzuki,T.: "Formation of 2′-deoxyoxanosine from 2′-deoxyguanosine and nitrous acid : mechanism and intermediates."Nucleic Acids Research. 28. 544-551 (2000)

Suzuki, T.：“从 2-脱氧鸟苷和亚硝酸形成 2-脱氧氧核苷：机制和中间体。” 28. 544-551 (2000)。

Suzuki,T.: "Identification and characterization of a reaction product of 2′-deoxyoxanosine with glycine."Chemical Research Toxicology. 13. 227-230 (2000)

Suzuki, T.：“2-脱氧氧核苷与甘氨酸反应产物的鉴定和表征。”化学研究毒理学。13. 227-230 (2000)