NMRによるアミロイドβペプチドとアミロイドβペプチド結合蛋白質の相互作用解析

NMR分析淀粉样蛋白β肽和淀粉样蛋白β肽结合蛋白的相互作用

基本信息

批准号：
16015246
负责人：
水口峰之
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルツハイマー病におけるアミロイド線維の主要な構成成分であるamyloid β - peptide (Aβ)は、40残基程度のペプチドである。本研究では、Aβ結合蛋白質であるtransthyretin, gelsolin,抗β抗体とAβの相互作用について研究した。1.原子間力顕微鏡(AFM)によるtransthyretinとAβの相互作用解析Aβ1-42のアミロイド線維は、幅約15nm、長さ約数十〜数百nmの直線状の線維として観測された。Aβ1-40のアミロイド線維は、Aβ1-42の線維と類似していたが、形成したアミロイド線維の量は少なかった。Transthyretinが存在するときには、Aβ1-40,Aβ1-42ともにアミロイド線維が形成されなかった。2.ゲルろ過クロマトグラフィーによるtransthyretinとAβの相互作用解析Aβ1-40溶液にtransthyretinを加えると、Aβオリゴマーのピークは影響を受けなかったが、モノマーのピーク強度が減少した。これらの結果から、transthyretinはAβのモノマーに結合しアミロイド線維へ凝集することを阻害していると考えられる。3.Gelsolinフラグメントの大量発現系の構築とAβとの相互作用解析Gelsolinの178-293残基(gelsolin178-293)がAβに結合しているのではないかと予想し、gelsolin178-293フラグメントの大量発現系の構築に取り組んだ。gelsolin178-293とAβの結合をBIACOREによって調べたところ、解離定数が6.8×10^<-6> (M)の弱い結合であることが分かった。

淀粉样β肽（Aβ）是阿尔茨海默氏病中淀粉样纤维的主要成分，是一种约40个残基的肽。在这项研究中，我们研究了Aβ结合蛋白转甲状腺素，凝胶蛋白和抗β抗体之间的相互作用。 1。通过原子力显微镜（AFM）对经硫素和Aβ进行的相互作用分析，Aβ1-42的淀粉样蛋白纤维被视为线性纤维，其宽度约为15 nm，长度约为15 nm，约为数百nm。 Aβ1-40的淀粉样纤维与Aβ1-42的纤维相似，但是形成的淀粉样纤维量很小。当存在硫代蛋白时，Aβ1-40和Aβ1-42都不形成淀粉样蛋白纤维。 2。通过凝胶过滤色谱法分析经胆囊素和Aβ之间的相互作用时，将经胸蛋白添加到Aβ1-40溶液中时，Aβ低聚物的峰不受影响，但单体的峰强度降低。这些结果表明，经硫代蛋白与Aβ单体结合并抑制聚集成淀粉样蛋白纤维。 3。凝胶蛋白片段的大规模表达系统及其相互作用分析，我们预测，凝胶蛋白与Aβ的残基178-293（Gelsolin178-293）结合了Aβ，我们致力于构建大型凝胶素178-293片段的大规模表达系统。 Biacore研究了凝胶林178-293与Aβ的结合，发现是弱键，离解常数为6.8×10^<-6>（m）。