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蛋白質のスローフォールディングにおける水の役割

水在减缓蛋白质折叠中的作用

基本信息

批准号：
18031013
负责人：
水口峰之
金额：
$ 3.33万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

超好熱菌PCPと中温菌PCPのキメラタンパク質を作製し安定性やアンフォールディング速度について調べた。超好熱菌PCPと中温菌PCPの立体構造を比較すると、超好熱菌PCPのC末端領域にはαヘリックスが2本(α5とα6)あるが、中温菌PCPではヘリックスの一部がループ構造になっている。そこで、超好熱菌PCPの異常に遅いアンフォールディングはC末端構造の違いによると予想し、数種類のキメラタンパク質を作製し実験を行った。超好熱菌PCPの174-208残基を中温菌PCPにしたキメラでは大きく不安定化したが、174-183残基だけを中温菌PCPに変えたキメラでは不安定化の程度はかなり小さかった。また、174-208残基を中温菌PCPにしたキメラではアンフォールディング速度が著しく増加した。したがって、超好熱菌PCPの高い熱安定性と異常に遅いアンフォールディングはC末端に位置する174-208残基の構造によることが明らかになった。また、超好熱菌PCPのC末端半分に相当する113-208残基のフラグメントPCP(113-208)を作製し、NMRによってその特徴を調べた。その結果、PCP(113-208)はマイクロ〜ミリ秒で運動しておりコンフォメーション交換の状態にあることがわかった。次に、さまざまな濃度の尿素存在下でPCP(113-208)の^1H-^<15>N HSQCを測定し変性過程について調べた。スペクトル上で分離していた複数のピークについて強度と^<15>Nケミカルシフトをプロットしたところ、PCP(113-208)の尿素変性は非協同的で徐々に起こることが示された。以上の結果から、超好熱菌PCPのフォールディングでは、フォールディング初期にC末端半分だけがモルテングロビュール様の構造をもつ中間体(D1状態)となり、その中間体は非協同的な相互作用によって安定化されていることがわかった。

Excellent bacteria PCP, medium temperature bacteria, PCP, temperature, temperature, Excellent bacteria PCP, mesophilic bacteria PCP, superfine bacteria PCP C-terminal microbes, alpha bacteria, and mesophilic bacteria PCP microbes. The PCP is very good, and it is very common for you to have a problem. The C-end of the system is designed to make you want to do something. Excellent bacteria PCP 174,208residues, PCP bacteria, moderate temperature bacteria, small temperature bacteria, PCP bacteria, small bacteria. PCP, 174,208residues of mesophilic bacteria, the temperature of the bacteria is higher than that of the control. The results showed that the position of the C-terminal, the PCP, the stability, the stability and the stability. The C-terminal half-minute of PCP is equivalent to the residue of 113,208and PCP (113,208C), and that of NMR. The result of the test, PCP (113,208C), please do not know how to do this in a few seconds. In the presence of urea, PCP (113,208H-^ & lt;15>N HSQC) is used to determine the severity of the sexual process. For example, we need to separate the data from each other, the number of copies, the strength, the strength. The results of the above results, the results of the above