トランスサイレチンのアミロイド線維形成と立体構造変化

淀粉样原纤维的形成和运甲状腺素蛋白的构象变化

• 批准号: 17028015
• 负责人: 水口 峰之
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17028015/
• 关键词: アミロイド; トランスサイレチン; アミロイド病; NMR; 細胞障害性; 中間体構造; プロリンスキャン; タンパク質; アミロイド線維; AFM; 家族性アミロイドポリニューロパシー

アミロイド病として知られる老人性全身アミロイドーシスや家族性アミロイドポリニューロパシーでは、トランスサイレチンがアミロイド線維となって生体内で蓄積し臓器障害をひき起こす。本研究では、溶液NMRやプロリンスキャン等の手法を用いて、トランスサイレチンがなぜ天然の立体構造を失ってアミロイド線維となりアミロイド病を引き起こすのかについて研究する。1.TTRペプチドに関する研究TTRの105-115残基からなるペプチドフラグメントは、アミロイド線維核が無い条件では可溶化状態で存在する。一方で、同じ溶液条件下においても、あらかじめ作製しておいた微量のアミロイド線維(線維核)を加えると速やかにアミロイド線維となる。本年度は、線結核が無い状態(可溶化状態)でのTTR(105-115)について溶液NMRの手法を用いて立体構造解析を行った。その結果、可溶化状態にあるTTR(105-115)は、αヘリックスやβストランド構造はとっておらずコンパクトな構造になっていることが示された。2.TTRの細胞障害性に関する研究アミロイド病の原因となるTTR変異体を18種類(V20I、S23N、E54K、E61K、S77Y、Y116Sなど)作製し、神経芽細胞種IMR-32に対する細胞障害性について研究した。その結果、E54KE、E61K、S77YおよびY116Sの細胞障害性が特に強いことがわかった。3.プロリンスキャン変異実験野生型TTRはpH2.0の条件下で部分的に変性しアミロイド様凝集物となる。部分的に変性した中間体構造について調べるためにプロリンスキャン変異実験を行った。結果から、アミロイド様凝集物が形成されるには、E Strand、F Strand、およびαヘリックスが重要であることがわかった。

ア ミ ロ イ ド disease と し て know ら れ る old human body ア ミ ロ イ ド ー シ ス や familial ア ミ ロ イ ド ポ リ ニ ュ ー ロ パ シ ー で は, ト ラ ン ス サ イ レ チ ン が ア ミ ロ イ ド line d と な っ て in raw で accumulation し viscera handicap of を ひ き up こ す. This study で は, solution NMR や プ ロ リ ン ス キ ャ ン の technique such as を with い て, ト ラ ン ス サ イ レ チ ン が な ぜ natural の three-dimensional structure を lost っ て ア ミ ロ イ ド line d と な り ア ミ ロ イ ド disease を lead き up こ す の か に つ い て research す る. 1. The TTR event ペ プ チ ド に masato す る research TTR event の residues 105-115 か ら な る ペ プ チ ド フ ラ グ メ ン ト は, ア ミ ロ イ ド line d nuclear が no い で は solubilization exist state で す る. Party で, with じ solution under the condition of に お い て も, あ ら か じ め cropping し て お い た trace の ア ミ ロ イ ド line d d nuclear (line) を え る と speed や か に ア ミ ロ イ ド line d と な る. は this year, line of TB が no い state (state) melting で の TTR event (105-115) に つ い て solution NMR の gimmick を with い analytical line を っ て three-dimensional structure た. そ の result, conditions for melting に あ る TTR event は (105-115), alpha ヘ リ ッ ク ス や beta ス ト ラ ン ド tectonic は と っ て お ら ず コ ン パ ク ト な tectonic に な っ て い る こ と が shown さ れ た. 2. TTR event の cells handicap of sexual に masato す る research ア ミ ロ イ ド diseases の と な る TTR event - variant を 18 species (V20I S23N E54K, E61K, S77Y, Y116S な ど) is a kind of IMR 経 bud cells し, god - 32 に す seaborne る cells handicap of sexual に つ い て research し た. Youdaoplaceholder0 そ results, E54KE, E61K, S77YおよびY116S <s:1> cell hindrances が particularly に strong った とがわ とがわ った った. 3. プ ロ リ ン ス キ ャ ン - vision be 験 wild-type TTR event は pH2.0 で part の conditions に - sex し ア ミ ロ イ ド others agglutination content と な る. The partial に variable <s:1> た intermediate structure に に て て modulation べるためにプロリ スキャ スキャ スキャ <s:1> variable experiment を process った. Results か ら, ア ミ ロ イ ド others agglutination formation が さ れ る に は, E Strand, F Strand, お よ び alpha ヘ リ ッ ク ス が important で あ る こ と が わ か っ た.

项目成果

Biosensor recognition of thyroid-disrupting chemicals using transport proteins

• DOI: 10.1021/ac051399i
• 发表时间: 2006-02-15
• 期刊: ANALYTICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 7.4
• 作者: Marchesini, GR;Meulenberg, E;Irth, H
• 通讯作者: Irth, H

Preparation and observation of fresh-frozen sections of the green fluorescent protein transgenic mouse head.

绿色荧光蛋白转基因小鼠头部鲜冻切片的制备及观察。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Acta Histochemica et Cytochemica 39・2
• 作者: Tada;T.;et al.
• 通讯作者: et al.

Crystallization and preliminary X-ray analysis of gene product 44 from bacteriophage Mu.

噬菌体 Mu 基因产物 44 的结晶和初步 X 射线分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Crystallographica F61
• 作者: Kondou;Y.;et al.
• 通讯作者: et al.

Disassembling and bleaching of chloride-free pharaonis halorhodopsin by octyl-beta-glucoside.

辛基-β-葡萄糖苷对无氯法老尼盐视紫红质的分解和漂白。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochemistry 44・39
• 作者: Kubo;M.;et al.
• 通讯作者: et al.

Effects of the stabilization of the molten globule state on the folding mechanism of α-lactalbumin : a study of a chimera of bovine and human α-lactalbumin.

熔球状态稳定对α-乳清蛋白折叠机制的影响：牛和人α-乳清蛋白嵌合体的研究。

• 发表时间: 2005
• 期刊: PROTEINS : Structure, Function, and Bioinformatics 61・2
• 作者: Mizuguchi;M.;et al.
• 通讯作者: et al.