魚類由来アミロイド線維成長阻害タンパク質の作用機構

鱼源淀粉样原纤维生长抑制蛋白的作用机制

• 批准号: 17657037
• 负责人: 水口 峰之
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657037/
• 关键词: アミロイド; Aβ; 不凍タンパク質; NMR; 相互作用; アミロイド線維; タンパク質; アミロイドβペプチド

アミロイドβペプチド(Aβ)は、39〜43残基からなるペプチドでありアミロイド線維となることでアルツハイマー病を引き起こす。低温環境で生息する魚類がもつ不凍タンパク質RDIIIは氷結晶の成長を妨げる機能を有する。前年度までの研究により、RDIIIはAβのアミロイド線維形成を阻害することが示されている。本研究では、RDIIIタンパク質がどのようにアミロイド線維形成を阻害するのかについて核磁気共鳴(NMR)等の手法を用いて研究する。1.RDIIIタンパク質の主鎖連鎖帰属前年度に引き続きRDIIIの^<13>C/^<15>Nラベル体を準備した。得られた^<13>C/^<15>Nラベル体を用いて、HNCAやCBCANHなどのNMRスペクトルを測定し主鎖連鎖帰属を行りた。主鎖連鎖帰属は従来の方法を用いて行った。2.RDIIIタンパク質とAβの相互作用解析RDIIIの^<15>Nラベル体を使って、RDIIIとAβの相互作用解析を行った。Aβモノマーが存在する条件下において^<15>Nラベル体のHSQCスペクトルを測定し、AβフリーのHSQCと比較した。その結果、ケミカルシフトやピーク強度に有意な変化は認められなかった。しかし、これら2つのNMRサンプルを低温で2週間以上インキュベーションすると、Aβ存在下におけるRDIIIのN末端10残基程度にシグナル強度の変化が認められた。Aβは、モノマー状態で長時間インキュベーションすると凝集して短い線維(線維核)となり、さらにAβモノマーの結合が進み伸張することによってアミロイド線維になることがわかっている。長時間のインキュベーションによってAβ存在下のRDIIIにスペクトル変化が生じたのは、RDIIIが線維核に結合していることを表していると考えられる。

ア ミ ロ イ ド beta ペ プ チ ド は (A beta), 39 ~ 43 residues か ら な る ペ プ チ ド で あ り ア ミ ロ イ ド line d と な る こ と で ア ル ツ ハ イ マ ー disease を lead き up こ す. Low temperature environment and nurture で す る fish が も つ non-freezing タ ン パ ク qualitative RDIII は 氷 crystallization の を hinder growth げ る function を have す る. Before the annual ま で の research に よ り, RDIII は A beta の ア ミ ロ イ ド form を resistance against d す る こ と が shown さ れ て い る. This study で は, RDIII タ ン パ ク qualitative が ど の よ う に ア ミ ロ イ ド form を resistance against d す る の か に つ い て nuclear magnetic 気 resonance (NMR), and other の gimmick を with い て research す る. 1. RDIII タ ン パ ク qualitative の Lord lock chain 帰 belong to former annual に き 続 き RDIII の ^ < 13 > C / ^ < 15 > N ラ ベ ル body を prepare し た. Have ら れ た ^ < 13 > C / ^ < 15 > N ラ ベ を ル body with い て, HNCA や CBCANH な ど の NMR ス ペ ク ト ル を determination し master lock chain 帰 を rows り た. The master lock chaining 帰 belongs to 従 従. The <s:1> method を uses the て て line った. 2. RDIII タ ン パ ク qualitative と parsing A beta の interaction RDIII の ^ < 15 > N ラ ベ ル body を make っ て, RDIII と A beta の interaction line analytical を っ た. A beta モ ノ マ ー が exist す る conditions に お い て ^ < 15 > N ラ ベ ル body の HSQC ス ペ ク ト ル を し, A beta フ リ ー の HSQC と compare し た. The そ そ result, ケ ケ カ シフトやピ シフトやピ シフトやピ <s:1> the <s:1> intensity に intentionally な varies and った is determined by められな った った った. し か し, こ れ ら 2 つ の NMR サ ン プ ル を で at low temperature for more than 2 weeks イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン す る と, the presence of A beta に お け る RDIII の N terminal 10 residue level に シ グ ナ の ル strength variations change が recognize め ら れ た. A beta は, モ ノ マ ー state で long イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン す る と agglutination し て short い line d d nuclear (line) と な り, さ ら に A beta モ ノ マ ー の combining が into み stretching す る こ と に よ っ て ア ミ ロ イ ド line d に な る こ と が わ か っ て い る. Long time の イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン に よ っ て in the presence of A beta の RDIII に ス ペ ク ト ル variations change が raw じ た の は, RDIII が line d nuclear に combining し て い る こ と を table し て い る と exam え ら れ る.

项目成果

Biosensor recognition of thyroid-disrupting chemicals using transport proteins

• DOI: 10.1021/ac051399i
• 发表时间: 2006-02-15
• 期刊: ANALYTICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 7.4
• 作者: Marchesini, GR;Meulenberg, E;Irth, H
• 通讯作者: Irth, H

Preparation and observation of fresh-frozen sections of the green fluorescent protein transgenic mouse head.

绿色荧光蛋白转基因小鼠头部鲜冻切片的制备及观察。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Acta Histochemica et Cytochemica 39・2
• 作者: Tada;T.;et al.
• 通讯作者: et al.

Crystallization and preliminary X-ray analysis of gene product 44 from bacteriophage Mu.

噬菌体 Mu 基因产物 44 的结晶和初步 X 射线分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Crystallographica F61
• 作者: Kondou;Y.;et al.
• 通讯作者: et al.

Disassembling and bleaching of chloride-free pharaonis halorhodopsin by octyl-beta-glucoside.

辛基-β-葡萄糖苷对无氯法老尼盐视紫红质的分解和漂白。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochemistry 44・39
• 作者: Kubo;M.;et al.
• 通讯作者: et al.

Effects of the stabilization of the molten globule state on the folding mechanism of α-lactalbumin : a study of a chimera of bovine and human α-lactalbumin.

熔球状态稳定对α-乳清蛋白折叠机制的影响：牛和人α-乳清蛋白嵌合体的研究。

• 发表时间: 2005
• 期刊: PROTEINS : Structure, Function, and Bioinformatics 61・2
• 作者: Mizuguchi;M.;et al.
• 通讯作者: et al.