Cdk9-サイクリンT複合体による発生・分化制御機構の解析

Cdk9-cyclin T复合物发育和分化控制机制分析

• 批准号: 16026213
• 负责人: 和田 忠士
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16026213/
• 关键词: 発生・分化; バイオテクノロジー; 遺伝子; 細胞・組織; 蛋白質; Cdk9; サイクリンT; ゼブラフィッシュ; PC-12; NGF; モルフォリノオリゴ; フラボピリドール; ドームステージ

本研究は、ゼブラフィッシュを用いて発生・分化の制御メカニズムをRNAポリメラーゼIIによる転写反応と関連させて分子レベルで解明することを目的としている。これまでに、転写反応を伸長段階で促進する活性で同定されたCdk9-サイクリンT複合体を標的として研究を進め、ゼブラフィッシュCdk9(zCdk9)の機能抑制実験をモルフォリノオリゴヌクレオチド(MO)の微小注入によるアンチセンス法およびCdk9の有するキナーゼ活性を特異的に阻害するフラボピリドールを用いて行った。その結果、いずれの場合もゼブラフィッシュの初期卵割が、受精後3.8時間のドームステージで停止することを見出した。RNAポリメラーゼIIの特異的阻害剤α-アマニチンを受精直後の卵に微小注入した場合、これまでの報告にあるようにドームステージで卵割が停止することを確認した。また、パルスラベル法により受精直後から6時間頃にかけて合成されるRNAを放射性標識し検出した。その結果、ゼブラフィッシュにおいては、受精後2時間から4時間の間に活発にRNA合成が始まることがわかった。さらに、zCdk9に対するMOの注入では、対象と比較してmRNA合成が特異的に阻害されることもわかった。これまでの報告によると、ゼブラフィッシュの中期胞胚遷移(MBT)は、受精後約3時間(10回目の細胞分裂時)に生じる。よって、Cdk9の機能阻害実験で観察される卵割の停止は、MBTで開始されるmRNA合成の阻害と密接に関連することが示唆された。一方、受精直後からMBTにかけてzCdk9のmRNAやタンパク質量を観察したが、それらの劇的な変動は今のところ観察されていない。今後は、MBT前後でのCdk9活性制御メカニズムの検討が必要であると考えられる。

This study aims to develop and differentiate RNA molecules from RNA molecules in order to elucidate their association. The study of Cdk9-Cdk9 (zCdk9) functional inhibition was carried out in order to improve the activity of Cdk9-Cdk9 (zCdk9) in the extension stage of Cdk9-Cdk9 complex. The results were as follows: 1. The initial stage of egg cleavage was observed at 3.8 hours after fertilization. The specific inhibitor α-α6 hours after fertilization, the RNA was synthesized and the radioactive marker was detected. The result is that RNA synthesis begins at 2 and 4 hours after fertilization. In addition, ZCdK9 can be used to inhibit the synthesis of mRNA. This report shows that metaphase embryo migration (MBT) occurs about 3 days after fertilization (10 cycles of cell division). The functional inhibition of cdk9 was observed in the expression of cdk9 mRNA, which was closely related to the inhibition of cdk9 mRNA synthesis. The expression of MBT mRNA was detected after fertilization. In the future, it is necessary to investigate the activity of Cdk9 before and after MBT.

项目成果

Infertility with Defective Spermiogenesis in Mice Lacking AF5q31, the Target of Chromosomal Translocation in Human Infant Leukemia

• DOI: 10.1128/mcb.25.15.6834-6845.2005
• 发表时间: 2005-08
• 期刊: Molecular and Cellular Biology
• 影响因子: 5.3
• 作者: Atsushi Urano;M. Endoh;T. Wada;Y. Morikawa;M. Itoh;Y. Kataoka;T. Taki;H. Akazawa;H. Nakajima;I. Komuro;N. Yoshida;Y. Hayashi;H. Handa;T. Kitamura;T. Nosaka

The VP2/VP3 minor capsid protein of SV40 promotes the in vitro assembly of the major capsid protein VP1 into particles.

SV40 的 VP2/VP3 次要衣壳蛋白促进主要衣壳蛋白 VP1 在体外组装成颗粒。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Biol.Chem. (in press)
• 作者: Kawano;MA.;et al.
• 通讯作者: et al.

NF-Y is essential for the recruitment of RNA polymerase II and inducible transcription of several CCAAT box-containing genes

• DOI: 10.1128/mcb.25.1.512-522.2005
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Kabe, Y;Yamada, J;Handa, H
• 通讯作者: Handa, H

Functional interactions of RNA-capping enzyme with factors that positively and negatively regulate promoter escape by RNA polymerase II

• DOI: 10.1073/pnas.0401493101
• 发表时间: 2004-05-18
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Mandal, SS;Chu, C;Reinberg, D
• 通讯作者: Reinberg, D

GABP, HCF-1 and YY1 are involved in Rb gene expression during myogenesis

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2005.00873.x
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Deléhouzée, S;Yoshikawa, T;Handa, H
• 通讯作者: Handa, H