核内におけるイントロン分解とスプライシング因子のリサイクル機構の解明

阐明细胞核内含子降解和剪接因子回收机制

• 批准号: 17026021
• 负责人: 片岡 直行
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026021/
• 关键词: mRNAスプライシング; イントロン; エクソン; 脱ブランチ反応; U snRNP; RNAスプライシング; ラリアット構造

高等真核生物の核にコードされる遺伝子の多くは、介在配列であるイントロンによって分断化されている。このため、核内で合成されたmlmA前駆体が、細胞質で蛋白質合成の鋳型として機能するためには、イントロンを取り除きエクソン同士を連結するmRNAスプライシングが必須となる。スプライシングにより切り出されたイントロンは核内にとどまり、スプライシング因子が除去された後分解されると考えられている。ヒトではイントロンはmRNA前駆体の実に95%を占めている。またsnoRNAやmicroRNAなどの機能的non coding RNAがイントロン上にコードされていることからも、イントロンの代謝は高等真核生物では重要な過程だと考えられる。しかし、その経路はほとんど明らかにされていない。本研究では、核内でのイントロンの代謝とスプライシング因子のリサイクル機構の解明を目的としている。イントロン代謝経路や、そこに関わる因子群を解析するため、in vitroスプライシング系を用いた精製系を開発し、イントロンータンパク質複合体を単離した。その結果、イントロン複合体中にはU2,U5,U6 snRNAが存在することがわかった。さらにこの複合体をグリセロール密度勾配遠心法により分画すると、沈降係数が大きいもの(L)と小さいもの(S)に分けられることがわかった。そして前述の3種類のU snRNPはLに存在し、Sにはほとんどないこと、さらにSに存在するラリアット型イントロンは脱ブランチ反応を受けやすいが、Lのものはほとんど受けないことがわかり、イントロンはスブライシング後にL、Sという二つの過程を経て分解されていくことがわかった。またイントロン複合体に存在する蛋白質因子群の同定を行い、いくつかのタンパク質を同定した。そしてそれらがラリアット型イントロンと結合していることをin vitroスプライシング反応系を用いて確認した。

In higher eukaryotes, nuclear DNA fragments are separated from each other in the sequence. The expression of mRNA is essential for the synthesis of proteins in the nucleus and cytoplasm. In addition to the above, the author also pointed out that it is necessary to improve the quality of the products. 95% of the mRNA precursors were found in this study. Non-coding RNA that functions as snoRNA and microRNA is an important process in higher eukaryotes. In the middle of the night, the sun rises and the moon rises. The purpose of this study is to elucidate the metabolism and structure of nuclear factors. The metabolic pathway and the related factor groups were analyzed, and the purification system was developed. As a result, U2, U5, and U6 snRNAs were present in the complex. The complex is divided into two groups: the density distribution center, the sedimentation coefficient, and the density distribution center. The three kinds of U snRNP mentioned above exist in L, S and S respectively, and the process of L, S and S is divided into two parts. The identity of protein factor groups is determined by the existence of protein complexes. It is also confirmed that there is a connection between remote control and remote control, which is used in the vitro software system.

项目成果

Shigella effector IpaH9.8 binds to a splicing factor U2AF35 to modulate host immune responses

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.05.145
• 发表时间: 2005-07-29
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Okuda, J;Toyotome, T;Sasakawa, C
• 通讯作者: Sasakawa, C

Binding of a novel SMG-1-Upf1-eRF1-eRF3 complex (SURF) to the exon junction complex triggers Upf1 phosphorylation and nonsense-mediated mRNA decay

• DOI: 10.1101/gad.1389006
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: GENES & DEVELOPMENT
• 影响因子: 10.5
• 作者: Kashima, I;Yamashita, A;Ohno, S
• 通讯作者: Ohno, S