生細胞でのAhリセプター転写複合体のイメージングと活性化機構

活细胞中Ah受体转录复合物的成像和激活机制

• 批准号: 18012005
• 负责人: 十川 和博
• 金额: $ 6.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18012005/
• 关键词: FLIM-FRET; LBP-1タンパク質; Arnt; ダイマー形成; タンパクータンパク相互作用; Ahリセプター; CYP1A2; LBP-1

FRETペアであるCeruleanとCitrineをLBP-1a,LBP-1b,LBP-1cのC末端に結合し培養生細胞で発現した。細胞質に局在するLBP-1aとLBP-cホモダイマー,LBP-1aとLBP-1cのヘテロダイマー間のFRETをCeruleanの蛍光寿命短縮とCitrine蛍光寿命曲線のライズにより観察したところ,強いFRETシグナルが観察できた。LBP-1bホモダイマー間のFRETも同様に計測できた。LBP-1c-CitrineとLBP-1a-CeruleanとLBP-1bを共発現し,LBP-1bにより核内に移行したLBP-1aとLBP-1c間のFRETを計測したところ,細胞質と同様にFRETシグナルが観察できた。この結果はLBP-1bとヘテロダイマーを形成することにより,核内に移行したLBP-1aとLBP-1cが,核内でヘテロダイマーを再形成することができることを示している。Arntは核局在の転写因子であるが,少なくとも培養細胞でトランスフェクションにより発現した場合PMLボディに局在する細胞が見られる。Arntに上記のFRETペア蛍光タンパク質を融合し,発現したところ,PMLボディに局在するときのみ,FRETが観察された。この結果からArntはホモダイマーを形成するが,生細胞核内ではホモダイマーとしては存在していないことが示唆された。また,Arnt欠失変異体のFLIM-FRET解析から,PMLボディでのFRETも,ホモダイマーからの結果でないことが推測された。

FRETペアであるCeruleanとCitrineをLBP-1a,LBP-1b,LBP-1c <s:1> c-terminal に binding to the lb-cultured biological cells で shows <s:1> た. Cytoplasm に bureau in す る LBP - 1 a と LBP -c ホ モ ダ イ マ ー, a と LBP LBP - 1-1 c の ヘ テ ロ ダ イ マ ー between の FRET を Cerulean の 蛍 light life shortening と Citrine 蛍 light life curve の ラ イ ズ に よ り 観 examine し た と こ ろ, strong い FRET シ グ ナ ル が 観 examine で き た. The LBP-1bホモダ ホモダ に に measure で た た. LBP - 1 c - Citrine と LBP - 1 a - Cerulean と LBP - 1 b を 発 し now, total of LBP - 1 b に よ り intranuclear に transitional し た LBP - 1 a と between LBP and 1 c の FRET を measuring し た と こ ろ, with others in the cytoplasm と に FRET シ グ ナ ル が 観 examine で き た. こ の results は LBP - 1 b と ヘ テ ロ ダ イ マ ー を form す る こ と に よ り, intranuclear に transitional し た LBP - 1 a と LBP - 1 c が, intranuclear で ヘ テ ロ ダ イ マ ー を reformulation す る こ と が で き る こ と を shown し て い る. Arnt は nuclear agency in の planning write factor で あ る が, less な く と も culture cell で ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ り 発 now し た occasions PML ボ デ ィ に bureau in す る cells が see ら れ る. Arnt に written の FRET ペ ア 蛍 light タ ン パ ク し を fusion, 発 now し た と こ ろ, PML ボ デ ィ に bureau in す る と き の み, FRET が 観 examine さ れ た. こ の results か ら Arnt は ホ モ ダ イ マ ー を form す る が, born within the nucleus で は ホ モ ダ イ マ ー と し て は exist し て い な い こ と が in stopping さ れ た. ま た, Arnt owe - variant の FLIM - FRET parsing か ら, PML ボ デ ィ で の FRET も, ホ モ ダ イ マ ー か ら の results で な い こ と が speculation さ れ た.

项目成果

Ternary complex formation of pVHL, elongin B and elongin C visualized in living cells by a fluorescence resonance energy transfer-fluo lifetime imaging micros copy technique

通过荧光共振能量转移-荧光寿命成像显微复制技术在活细胞中观察 pVHL、elongin B 和 elongin C 三元复合物的形成

• 发表时间: 2007
• 期刊: FEBS Journal 274
• 作者: Jormakka;M.;Yokoyama;K.;Yano;T.;Tamakoshi;M.;Akimoto;S.;Shimamura;T.;Curmi;P.;and Iwata;S;Koshi Kinoshita
• 通讯作者: Koshi Kinoshita

培養細胞の核内におけるArntのFLIM-FRET解析

培养细胞核中 Arnt 的 FLIM-FRET 分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 嶋田透;嶋田正和;竹田敏;鎮西康雄;寺山守;山元大輔;御領 憲治
• 通讯作者: 御領 憲治

Identification of amino acid residues in the Ah receptor involved in ligand binding

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.12.227
• 发表时间: 2007-03-09
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Goryo, Kenji;Suzuki, Ai;Sogawa, Kazuhiro
• 通讯作者: Sogawa, Kazuhiro