权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ツ-ハイブリッド系によるArnt及びPASタンパク質に結合する因子の単離

使用双杂交系统分离与 Arnt 和 PAS 蛋白结合的因子

基本信息

批准号：
08680672
负责人：
十川和博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680672/
关键词：
タンパク-タンパク相互作用転写因子コアクティベータ-

项目摘要

ArntのC端末部に存在する転写活性化ドメインを除いた部分を、GAL4のDNA結合部位のC末端につなぎ、いわゆる、酵母のツ-ハイブリッドシステムを用いて、Arnt結合タンパク質をヒト胎児肝臓のcDNAライブラリーと、マウスリンフォーマのcDNAライグラリー、それぞれ約百万個ずつスクリーニングした。その結果ヒト胎児肝臓ライブラリーから4種の、マウスリンフォーマライブラリーから11種のクローンを得た。この中で既知のクローンは5種であった。HLHとPASドメインをもつクローンはなかった。Arntとの相互作用が比較的強い、有望と思われるものを選びさらに検討した。N末端部分がかけていたので、マウス脾臓cDNAライブラリーをスクリーニングし、full lengthのcDNAを得た。このcDNAクローンは534残基のアミノ酸からなるタンパク質をコードしていた。塩基性アミノ酸と酸性アミノ酸に富み、全体としてはプラスにチャージしていた。酵母で発現させその活性を調べたところ、AhリセプターとArntとの複合体の転写活性を、数倍強めることが分かった。またHIF-1aとArntとの複合体の転写活性も増強した。これらの結果は、見いだされたタンパク質が、Arnt依存性の転写を活性化するコアティベータ-であることを強く示唆する。ほ乳類培養細胞では、内在性の発現があるせいか現在までのところ、酵母で見られた活性は観察されていない。ノーザンブロッティングの結果、本遺伝子は全ての組織で発現していた。また細胞内局在を調べた結果、核に存在していることが分かった。

Arnt C-terminal region contains active DNA fragments, GAL4 DNA binding region C-terminal region, yeast DNA fragments, Arnt binding region, cDNA fragments, cDNA fragments, and about one million DNA fragments. The results of the study show that there are 4 kinds of children's diseases, and 11 kinds of diseases. 5 kinds of. HLHとPASドメインをもつクローンはなかった。Arnt interaction is relatively strong, and it is expected to be discussed later. N-terminal part is divided into two parts: full length cDNA and full length cDNA. This cDNA fragment contains 534 amino acid residues. The basic properties of the acid and the acid are rich, and the whole process is simple. The activity of yeast is regulated by several times. The activity of HIF-1a and Arnt complexes increased. The results of this study strongly demonstrate that the quality of the data is improved and the writing of Arnt dependencies is activated. In milk culture cells, intrinsic activity is detected. As a result, the gene was completely transformed into tissue. In the cell, there is a result of regulation, and there is a difference in the nucleus.