精製した転写因子を用いたP4501A1遺伝子の誘導的発現のインビトロ解析

使用纯化的转录因子体外分析 P4501A1 基因的诱导表达

• 批准号: 06680601
• 负责人: 十川 和博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680601/
• 关键词: Ahリセプター; Arnt; Sp1; バキュロウイルス発現系; RNAポリメラーゼ

P4501A1遺伝子の転写に必要な三つの転写因子Ahリセプター、Arnt、Splをバキュロウイルスの発現系を使って調製した。得られた粗抽出物をさらにニッケルアルフィニティークロマトグラフィーでさらに精製した。この操作で5x10^8の細胞から20μgのAhリセプター、80μgのArnt、80μgのSp1をそれぞれ純度20%,80%,80%で得ることができた。またSp1についてはHeLa細胞核抽出液からも分離精製した。これらの因子とその特異性抗体を使ってSp1とAhリセプター、Sp1とArntが結合することを見いだした。さらに、これらの精製因子と、AhリセプターとArntのヘテロダイマーが認識するXREを4個、Sp1が認識するGCボックスを1個プロモーターにもつGフリーカセットをテンプレートに使ってインビトロ転写実験を行った。基本転写因子群はRNAポリメラーゼを含むHeLa細胞の核抽出液で、すでにわかっているSp1の転写効果をまず検討したところ、バキュロウイルス発現系で調製したSp1よりもHeLa細胞由来のSp1の方が転写活性が強かった。バキュロウイルス発現系のSp1はコンフォメーションが十分でない可能性がある。つぎにAhリセプター、Arntの添加効果を調べたところSp1のみに比較して約2倍の転写活性化を観察した。Ahリセプター、Arntだけでは転写活性化はおきなかった。これらの結果は動物実験や培養細胞でのP4501A1遺伝子のAhリセプターとArntを介した転写活性化(約30倍)には及ばないものの3個の転写因子の寄与を確認したことになり、一定の成果を得ることができた。

P4501A1 is a new type of transmission, which requires three factors: Ah, Arnt, Spl, etc. The first step is to extract the raw material from the raw material. The operation is 5x10^8 cells, 20μg of Arnt, 80 μ g of Sp1, and purity is 20%, 80%, 80%. Sp1 is the best way to isolate and refine HeLa cell nuclear extract. The specific antibodies of the two factors bind to each other. 4 XRE, 1 GC, 1 SP1, 1 SP2, 1 SP3, 2 SP4, 3 SP5, 4 SP6, 1 SP7, 1 SP8, 1 SP9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 10, Basic transcription factor groups modulate the expression of Sp1 in HeLa cell-derived nuclear extracts, including the expression of Sp1 in HeLa cell-derived nuclear extracts. The Sp1 of the development system is very likely to occur. The effect of adding Arnt and Arnt is about 2 times higher than that of Sp1. Ah, it's a good idea. The results showed that P4501A1 gene was activated (about 30-fold) and the three gene expression factors were confirmed.

项目成果

K.Sogawa: "Possible Function of Ah Receptor Naclear Translodtor(Arnt)homaodimer in Transciptional Regulation" Proe.Natl.Acad.Sci.U.S.A. (in press).

K.Sokawa：“Ah 受体 Naclear Translodtor(Arnt)homaodimer 在转录调节中的可能功能”Proe.Natl.Acad.Sci.U.S.A.

J.Mimura: "A Complete Structure of the Ah Receptor Gene" Pharmacogenetics. 4. 349-354 (1994)

J.Mimura：“Ah 受体基因的完整结构”药物遗传学。

M.Ema: "Human Arylhydroearbon Receptor:Functional Expression and Chromosmal Assignment to 7 p21" J.Biochem.116. 845-851 (1994)

M.Ema：“人芳基氢碳受体：功能表达和 7 p21 的染色体分配”J.Biochem.116。

M.Ema: "Dioxin Binding Activities of Polymorphic Forms of Mouse and Human Arylhydrocarbon Receptors" J.Biol.Chem.269. 27337-27343 (1994)

M.Ema：“小鼠和人芳基烃受体多晶型物的二恶英结合活性”J.Biol.Chem.269。

A.Kobayashi: "Analysis of Functional Domains of a GC Box-Birding Protein,BTEB" J.Biochem.117. 91-95 (1995)

A.Kobayashi：“GC Box-Birding 蛋白 (BTEB) 功能域的分析”J.Biochem.117。