薬物誘導型Pー450遺伝子プロモ-タ-に働く転写因子の解析

药物诱导的P-450基因启动子转录因子分析

• 批准号: 02680149
• 负责人: 十川 和博
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680149/
• 关键词: 転写因子; 薬物誘導; Zinc Finger構造; GCボックス

Pー450c遺伝子の誘導的発現にはプロモ-タ-領域に存在するBTEと名づけたエレメントが必要であり、そこに結合する因子として全蛋白質領域を含むcDNAクロ-ンをラット肝臓cDNAライブラリ-より得、BTEーBと名づけた。BTEーBはアミノ酸244残基から成り、C末端付近に3つのZinc Finger構造があった。またその他の部分は現在まで報告されている蛋白質と構造上の類似性はなかった。本cDNAを大腸菌で発現させるため、T7ファ-ジのプロモ-タ-の下流にBTEーBcDNAを接合したプラスミドを作製し,T7ポリメラ-ゼ活性をもつ大腸菌BL21株をトランスフォ-ムした。IPTG処理をした大腸菌から得られた抽出液にはBTEに結合する活性が確認された。また大腸菌で発現したBTEーBはBTEの他、種々のGCボックス塩基配列をもつオリゴヌクレオチドプロ-ブに結合した。現在この抽出液からBTEーBを精製中である。またBTEーBが転写調節因子として働く可能性を培養細胞を用いたトランスフェクション実験で検討中である。同じく薬物代謝型のPー450であるフェノバルビタ-ルで誘導されるPー450b遺伝子のプロモ-タ-領域にBTE類似の塩基配列を見出したのでその転写活性について検討した。Pー450b遺伝子上流とCAT構造遺伝子を接合したプラスミドを作製し、ラット肝癌由来のH4IIEC3細胞にトランスフェクションしたところ、強いCAT活性が見出されたがBTE類似配列をそのプラスミドから欠失させるとCAT活性はほぼ消失した。またHeLa細胞抽出液を用いたinvitro転写実験でもこのBTE類似配列が転写を促進することを見出した。また大腸菌で発現したBTEーBはこのPー450bBTE類似配列に結合した。

The expression of P-450c gene was induced by BTE and BTE in the whole protein domain. BTE B Other parts of the protein are reported to be structurally similar. This cDNA was developed in E. coli strain BL21 and was used to control the conjugation of BTE cDNA downstream from T7. IPTG treatment of E. coli extracts confirmed BTE binding activity BTE B is a member of the BTE family. Now the Kono extract is being refined by BTE ‑ B. BTE-B is a novel regulator for cell culture. The metabolic pattern of the same compound P-450 is detected by the enzyme activity of the BTE-like substrate in the P-450b domain. P450b gene up-stream CAT structural gene binding to inhibit the growth of H4 IIEC 3 cells, the origin of HCC, strong CAT activity was observed, and BTE-like alignment to inhibit CAT activity disappeared. HeLa cell extracts are used to promote the development of BTE-like structures. E. coli is found in BTE-B and P-450 bBTE-like combinations.

项目成果

M.Hayashi: "Somatostatin gene expression in the developing monkey frontal and cerebellar cortices" Brain Res.57. 37-41 (1990)

M.Hayashi：“发育中的猴子额叶和小脑皮质中的生长抑素基因表达”Brain Res.57。

A.Yanagida: "Novel cisーacting element required for a high level of inducible expression of the rat Pー450c gene" Mol.Cell.Biol.10. 1470-1475 (1990)

A.Yanagida：“大鼠 P-450c 基因高水平诱导表达所需的新型顺式作用元件”Mol.Cell.Biol.10 1470-1475 (1990)。

N.Yokotani: "cDNA cloning and expression of the mRNA fof cytochrome Pー450kd which shows a fatty acid ωーhydroxylating activity" Eur.J.Biochem.

N. Yokotani：“显示脂肪酸 ω-羟基化活性的细胞色素 P-450kd mRNA 的 cDNA 克隆和表达”Eur.J.Biochem。

N.Yokotani: "cDNA cloning of cytochrome Pー450 related to Pー450pー2 from the cDNA library of human placenta" Eur.J.Biochem.187. 23-29 (1990)

N. Yokotani：“来自人胎盘 cDNA 文库的与 P-450p-2 相关的细胞色素 P-450 的 cDNA 克隆”Eur.J.Biochem.187 (1990)。

O.Minowa: "Functional expression of microsomal and mitochondrial cytochrome Pー450(d and SCC) in COSー7 cells from cloned cDNA" Cell Structure and Function. 15. 21-30 (1990)

O.Minowa：“来自克隆 cDNA 的 COS-7 细胞中微粒体和线粒体细胞色素 P450（d 和 SCC）的功能表达”《细胞结构和功能》15. 21-30 (1990)。