薬物代謝型Pー450遺伝子に働く転写調節因子の機能解析

作用于药物代谢 P-450 基因的转录调节因子的功能分析

• 批准号: 03680161
• 负责人: 十川 和博
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03680161/
• 关键词: DNA結合蛋白質; Zincフィンガ-ドメイン; GCボックス; DNAトランスフェクション; 転写調節

GCボックスに結合するBTEBの性質を今年度は更に深く調べた。まずBTEBの転写活性化能を検討するため、BTEB cDNAを、強いプロモ-タ-活性をもつRSVまたはCMVのプロモ-タ-下流に接続し、種々の培養細胞で発現するエフェクタ-プラスミドを作製した。作製したエフェクタ-を、GCボックスをプロモ-タに持つpSV2CAT、pHIVCATなどのレポ-タ-とともに種々の培養細胞ヘトランスフェクションを行なった。この結果、GCボックスを複数個プロモ-タ-にもつレポ-タ-はBTEBは転写活性化したが、1つしかもたないレポ-タ-についてはBTEBは転写を活性化しないことが判明した。これはSp1が全てのプロモ-タ-を活性化するのと対照的であった。またBTEB mRNAは調べた全ての組織で発現しており、組織特異性はないと考えられた。大腸菌で発現させたBTEBとSp1を使って、DNAへの結合を検討した結果、OHラジカルフットプリンティング、メチレ-ション結合阻害実験等で、全く2つの因子のDNA結合の塩基配列特異性に差がないことがわかった。BTEB cDNAをプロ-ブとして、ヒト胎盤cDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところ、やはりZincフィンガ-構造を持つ、Sp1ともBTEBとも異なる第三のGCボックス結合蛋白質をクロ-ニングすることができた。この219個のアミノ酸から成るBTEB2と名づけた蛋白質も転写活性化能があり、プロリンリッチドメインがそれに関与していることがうかがわれた。またBTEB2mRNAは胎盤と精巣に特異的に発現していることがわかった。

GCボッ スに スに, in combination with the するBTEB <s:1> properties を, has a more に and く tone べた this year. ま ず BTEB の planning can write activeness を beg す 検 る た め, BTEB cDNA を, strong い プ ロ モ タ - active を も つ RSV ま た は CMV の プ ロ モ タ - dirty に meet 続 し, kind of 々 の culture cell で 発 now す る エ フ ェ ク タ - プ ラ ス ミ ド を cropping し た. Cropping し た エ フ ェ ク タ を, GC - ボ ッ ク ス を プ ロ モ - タ に hold つ pSV2CAT, pHIVCAT な ど の レ ポ タ - と と も に kind 々 の culture cell ヘ ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を line な っ た. こ の results, GC ボ ッ ク ス を plural プ ロ モ タ - に も つ レ ポ タ - は BTEB は planning write activeness し た が, 1 つ し か も た な い レ ポ タ - に つ い て は BTEB は planning write を activeness し な い こ と が.at し た. こ れ は Sp1 が full て の プ ロ モ タ - を activeness す る の と of seaborne で あ っ た. The べた regulation of またBTEB mRNA is べた throughout て <s:1> tissue で, and the <s:1> てお てお えられた えられた and the tissue-specific な な と are observed in えられた. Coliform で 発 now さ せ た BTEB と Sp1 を make っ て, DNA へ の combining を beg し 検 た results, OH ラ ジ カ ル フ ッ ト プ リ ン テ ィ ン グ, メ チ レ - シ ョ ン combined with resistance to harm be 験 で, such as full く 2 つ の factor の dna-binding の salt base with column poor specificity に が な い こ と が わ か っ た. BTEB cDNA を プ ロ - ブ と し て, ヒ ト placenta cDNA ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し た と こ ろ, や は り any Zinc フ ィ ン ガ - structure を hold つ, Sp1 と も BTEB と も different な る third の GC ボ ッ ク ス binding protein を ク ロ - ニ ン グ す る こ と が で き た. 219 の こ の ア ミ ノ acid か ら into る BTEB2 と name づ け た protein も planning can write activeness が あ り, プ ロ リ ン リ ッ チ ド メ イ ン が そ れ に masato and し て い る こ と が う か が わ れ た. Youdaoplaceholder0 BTEB2mRNA と placental と spermatospermic に specific に occurrence る て る る とがわ とがわ に った.

项目成果

H.Imataka: "Two Regulatory Proteins Binding to the Basic Transcription Element,a GC Box Sequence in the Promoter Region of Rat Pー4501A1 Gene" EMBO.J.

H.Imataka：“与基本转录元件结合的两种调节蛋白，大鼠 P-4501A1 基因启动子区域的 GC 盒序列” EMBO.J。

M.Ema: "cDNA Cloning and Structure of Mouse Putative Ah Receptor (XREーbinding protein)" Biochem.Biophys.Res.Commun.

M.Ema：“小鼠推定 Ah 受体（XRE 结合蛋白）的 cDNA 克隆和结构”Biochem.Biophys.Res.Commun。

N.Yokotani: "cDNA cloning and Expression of the mRNA for Cytochrome Pー450kd which shows a fatty acid ωーhydroxylating activity" Eur.J.Biochem.196. 531-536 (1991)

N. Yokotani：“显示脂肪酸 ω-羟基化活性的细胞色素 P-450kd 的 mRNA 的 cDNA 克隆和表达”Eur.J.Biochem.196（1991）。

M.Kubota: "Xenobiotic Responsive Element in the 5'ーUpstream Region of the Human Pー450c Gene" J.Biochem.110. 232-236 (1991)

M.Kubota：“人类 P-450c 基因 5-上游区域的异生素响应元件”J.Biochem.110 232-236 (1991)。

Y.Kikuta: "A Novel Species of Cytochrome Pー450(Pー450ib) Specific for the Small Intestine of Rabbit cDNA cloning and Its Expression in Cos cells" J.Biol.Chem.266. 17821-17825 (1991)

Y.Kikuta：“兔小肠特异性细胞色素 P-450(P-450ib) 的新物种 cDNA 克隆及其在 Cos 细胞中的表达”J.Biol.Chem.266 (1991)。