权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

薬物代謝酵素の外来異物による誘導に関するタンパク質リン酸化機構の解明

阐明与异物诱导药物代谢酶相关的蛋白质磷酸化机制

基本信息

批准号：
07680669
负责人：
十川和博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680669/
关键词：
Ahリセプター Arnt タンパク質リン酸化

项目摘要

薬物代謝の代表的な酵素であるチトクロームP-4501A1はベンツピレンやダイオキシンなどの環境汚染物質によって誘導される。この誘導には外来異物をリガンドとして受容するAhリセプター(AhR)とArntと名づけられたタンパク質がヘテロダイマーを形成し、遺伝子転写調節領域に存在するXRE(Xenobibtic Respensive Element)に結合することによっておこる。またこの過程にAhR/Arntのリン酸化が必要であることが示唆されている。我々はこのAhRとArntのcDNAを発現プラスミドに組み込み培養細胞(293cell)で発現させた。このとき培養液に^<32>Pで標識した無機リン酸を加え、AhRとArntの特異抗体で免疫沈降を行い、SDSPAGEによって解析したところ、AhRもArntもリン酸化タンパク質であることが判明した。ただしAhRについては用いた抗体の特異性が低いためとAhRの発現量が少ないため非常に弱いシグナルしか得られなかった。Arntに関してリン酸化アミノ酸を分析したところセリン残量がリン酸化されていることがわかった。これとは別にAhRとArntをバキュロウイルス系で大量発現し、DNA結合活性をXREをプローブとしてゲルシフトアッセイで調べた。その結果ヘテロダイマーによる特異的な結合が観察された。この系で発現したAhRとArntがリン酸化されているかどうかは不明であるが、発現したAhRとArntをバクテリア由来とウシ小腸由来のアルカリホスファターゼで処理したところ、そのDNA結合活性は変化しなかった。このことからAhRとArntのヘテロダイマーのDNA結合活性にはリン酸化の影響がないことが示唆された。以上の結果からAhR/Arntによる誘導系に対するリン酸化の影響はDNA結合以外のところで必要であることが推定された。

A representative enzyme for the metabolism of chemicals P-4501A1 is an enzyme that can be induced by environmental pollutants. The induction of foreign matter in the presence of a xenobiotic responsive element (AhR) and an arnt-like element in the presence of a xenobiotic responsive Element. However, this process has been complicated by the need for AhR/Arnt acidification. The cDNA of AhR and Arnt was developed in cultured cells (293 cells). The <32>culture medium was identified by the addition of inorganic acid, AhR and Arnt specific antibodies, and by the identification of SDSPAGE. The specificity of the antibody is low and the amount of AhR is very weak. Arnt analysis of acid residues A large amount of DNA binding activity was detected in the system. The result is that This is the first time that the AhR and Arnt have been identified. The AhR and Arnt have been identified. The DNA binding activity has been identified. The DNA binding activity of the enzyme is affected by the enzyme. The above results indicate that the DNA binding mechanism is essential.