薬物代謝酵素の外来異物による誘導に関するタンパク質リン酸化機構の解明

阐明与异物诱导药物代谢酶相关的蛋白质磷酸化机制

• 批准号: 07680669
• 负责人: 十川 和博
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680669/
• 关键词: Ahリセプター; Arnt; タンパク質リン酸化

薬物代謝の代表的な酵素であるチトクロームP-4501A1はベンツピレンやダイオキシンなどの環境汚染物質によって誘導される。この誘導には外来異物をリガンドとして受容するAhリセプター(AhR)とArntと名づけられたタンパク質がヘテロダイマーを形成し、遺伝子転写調節領域に存在するXRE(Xenobibtic Respensive Element)に結合することによっておこる。またこの過程にAhR/Arntのリン酸化が必要であることが示唆されている。我々はこのAhRとArntのcDNAを発現プラスミドに組み込み培養細胞(293cell)で発現させた。このとき培養液に^<32>Pで標識した無機リン酸を加え、AhRとArntの特異抗体で免疫沈降を行い、SDSPAGEによって解析したところ、AhRもArntもリン酸化タンパク質であることが判明した。ただしAhRについては用いた抗体の特異性が低いためとAhRの発現量が少ないため非常に弱いシグナルしか得られなかった。Arntに関してリン酸化アミノ酸を分析したところセリン残量がリン酸化されていることがわかった。これとは別にAhRとArntをバキュロウイルス系で大量発現し、DNA結合活性をXREをプローブとしてゲルシフトアッセイで調べた。その結果ヘテロダイマーによる特異的な結合が観察された。この系で発現したAhRとArntがリン酸化されているかどうかは不明であるが、発現したAhRとArntをバクテリア由来とウシ小腸由来のアルカリホスファターゼで処理したところ、そのDNA結合活性は変化しなかった。このことからAhRとArntのヘテロダイマーのDNA結合活性にはリン酸化の影響がないことが示唆された。以上の結果からAhR/Arntによる誘導系に対するリン酸化の影響はDNA結合以外のところで必要であることが推定された。

薬 material metabolism の representative な enzyme で あ る チ ト ク ロ ー ム P - 4501 - a1 は ベ ン ツ ピ レ ン や ダ イ オ キ シ ン な ど の environmental pollutants に よ っ て induced さ れ る. こ の induced に は alien invaders を リ ガ ン ド と し て by let す る Ah リ セ プ タ ー (AhR) と Arnt と name づ け ら れ た タ ン パ ク qualitative が ヘ テ ロ ダ イ マ ー を し, heritage 伝 son planning, regulating field exist に す る XRE (Xenobibtic Respensive Element)に combined with する とによってお とによってお る. The process of また されて る る にAhR/Arnt リ リ <s:1> acidification が necessary である とが とが とが prompts されて る る る る. I 々 は こ の AhR と Arnt の cDNA を 発 now プ ラ ス ミ ド に group み 込 み cultured cells (293 cell) で 発 now さ せ た. こ の と き culture に ^ < > 32 P で logo し た inorganic リ ン acid を え, AhR と Arnt で の specific antibody immune sink を い, SDSPAGE に よ っ て parsing し た と こ ろ, AhR も Arnt も リ ン acidification タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が.at し た. た だ し AhR に つ い て は with い の た antibody specificity が low い た め と AhR の 発 now fewer が な い た め very weak に い シ グ ナ ル し か have ら れ な か っ た. Arnt に masato し て リ ン acidification ア ミ ノ acid を analysis し た と こ ろ セ リ ン residual が リ ン acidification さ れ て い る こ と が わ か っ た. こ れ と は don't に AhR と Arnt を バ キ ュ ロ ウ イ ル ス で large 発 し now, DNA binding activity を XRE を プ ロ ー ブ と し て ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ で adjustable べ た. The そ そ result ヘテロダ ヘテロダ による による による による specific な combined with が観 examination された. こ の is で 発 now し た AhR と Arnt が リ ン acidification さ れ て い る か ど う か は unknown で あ る が, 発 し た AhR と Arnt を バ ク テ リ ア origin と ウ シ intestinal origin の ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ で 処 Richard し た と こ ろ, そ の DNA binding activity は variations change し な か っ た. こ の こ と か ら AhR と Arnt の ヘ テ ロ ダ イ マ ー の DNA binding activity に は リ ン acidification の influence が な い こ と が in stopping さ れ た. の above results か ら AhR/Arnt に よ る induction system に す seaborne る リ ン acidification の outside influence は dna-binding の と こ ろ で necessary で あ る こ と が presumption さ れ た.

项目成果

K. Sogawa: "Transcriptional Activation Domain of the Ah Receptor and Arnt (Ah Receptor Nuclear Trans locator)" J. Cancer Res. Clin. Oncol.121. 612-620 (1995)

K. Sokawa：“Ah 受体和 Arnt（Ah 受体核转位子）的转录激活域”J. Cancer Res。

Y. Fujii -Kuriyama: "Polymorphic Forms of the Ah Receptor and Induction of the CYP1A1 Gene" Pharmacogenetics. 5. 5149-5153 (1995)

Y. Fujii -Kuriyama：“Ah 受体的多态性形式和 CYP1A1 基因的诱导”药物遗传学。

A.Kobayashi: "Analysis of Functional Domains of a GCBox-Binding Protein,BTEB" J.Biochem.117. 91-95 (1995)

A.Kobayashi：“GCBox 结合蛋白 BTEB 功能域的分析”J.Biochem.117。

Y. Kikuchi: "Purification and Characterization of the DNA-binding Domain of BTEB, a GC-Box Binding Transcription Factor Expressed in Eschrichia coli" J. Biochem.(in press).

Y. Kikuchi：“BTEB 的 DNA 结合域的纯化和表征，BTEB 是一种在大肠杆菌中表达的 GC-Box 结合转录因子”J. Biochem.（出版中）。

M. Ema: "cDNA Cloning of Murine Homologue of Drosophila Single-minded (sim), its mRNA Expression in Mouse Development and Chromosomal Localization" Biochem. Biophys. Res. Commom.(in press).

M. Ema：“果蝇单向鼠同源物 (sim) 的 cDNA 克隆及其在小鼠发育和染色体定位中的 mRNA 表达”Biochem。